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更新時間：2018-08-17
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Cytoskeleton，Inc。很高興為藥物篩選，信號轉導和細胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質和易于使用的試劑盒，以研究生物化學和細胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品，用于基礎研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）。
除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品，我們還在產(chǎn)品線中為微管，微管蛋白，運動蛋白，小G蛋白效應物，GAP，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務。
Cytoskeleton的Biochem Kits™是用于分析細胞骨架生物化學和信號轉導的不同方面的綜合試劑盒。這些工具包通常構成出版物中圖形的基礎，請查看引文標簽中的示例。該試劑盒附帶了分析所需的所有試劑以及如何使用它們的詳細說明，因此您可以在準備好試劑盒后立即進行分析！
許多出版物引用了在論文的材料和方法部分中使用Cytoskeleton的試劑盒。通常，引文與圖形或圖像形式的特定結果相關聯(lián)，這有助于您，作者，您的發(fā)現(xiàn)。這表明套件可在短時間內生成出版物質量數(shù)據(jù)，從而有助于提高工作效率。肌動蛋白試劑盒的引用示例如下所示。個別產(chǎn)品頁面上提供了更多引文。??
肌動蛋白結合蛋白旋轉分析Biochem試劑盒：兔骨骼肌肌動蛋白（Cat。＃BK001） |
Takeshita，N.，Ohta，A。和Horiuchi，H。（2005）。CsmA是一種具有肌球蛋白運動樣結構域的V類幾丁質合酶，通過與構巢曲霉中肌動蛋白細胞骨架的直接相互作用進行定位。摩爾。生物學。細胞16,1961-1970。 |
Banerjee，J。和Wedegaertner，PB（2004）。鑒定PDZ-RhoGEF中的新序列，其介導與肌動蛋白細胞骨架的相互作用。摩爾。生物學。Cell 15,1760-1775。 |
Kumar，N.，Zhao，P.，Tomar，A.，Galea，CA和Khurana，S。（2004）。絨毛蛋白與磷脂酰肌醇4,5-二磷酸的結合調節(jié)肌動蛋白細胞骨架。J. Biol?；瘜W。279,3096-3110。 |
Torgler，CN，Narasimha，M.，Knox，AL，Zervas，CG，Vernon，MC和Brown，NH（2004）。Tensin穩(wěn)定果蠅中的整合素粘合劑接觸。開發(fā)。Cell 6,357-369。 |
Oliver，CJ，Terry-Lorenzo，RT，Elliott，E.，Bloomer，W??A，Li，S.，Brautigan，DL，Colbran，RJ和Shenolikar，S。（2002）。將蛋白磷酸酶1（PP1）靶向肌動蛋白細胞骨架：neurabin I / PP1復合物調節(jié)細胞形態(tài)。摩爾。細胞。生物學。22,4690-4701。 |
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肌動蛋白聚合生物化學試劑盒（熒光形式）：兔骨骼肌肌動蛋白（Cat。＃BK003） |
Takamiya，R.，Takahashi，M.，Park，YS，Tawara，Y.，F(xiàn)ujiwara，N.，Miyamoto，Y.，Gu，J.，Suzuki，K。和Taniguchi，N。（2005）。神經(jīng)母細胞瘤細胞中突變的Cu，Zn-SOD的過度表達導致細胞骨架改變。上午。J. Physiol。288，C253-259。 |
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Zhai，L.，Zhao，P.，Panebra，A.，Guerrerio，AL和Khurana，S。（2001）。絨毛蛋白的酪氨酸磷酸化調節(jié)肌動蛋白細胞骨架的組織。J. Biol?；瘜W。276,36163-36167。 |
Blader，IJ，Cope，MJ，Jackson，TR，Profit，AA，Greenwood，AF，Drubin，DG，Prestwich，GD和Theibert，AB（1999）。GCS1是釀酒酵母中的Arf鳥苷三磷酸酶活化蛋白，是體內正常肌動蛋白細胞骨架組織所必需的，并且在體外刺激肌動蛋白聚合。摩爾。生物學。Cell 10,581-596。 |
肌動蛋白結合蛋白旋轉分析Biochem試劑盒：人血小板肌動蛋白（Cat。＃BK013） |
Gohla，A.，Birkenfeld，J。和Bokoch，GM（2005）。Chronophin是一種新型HAD型絲氨酸蛋白磷酸酶，可調節(jié)cofilin依賴性肌動蛋白動力學。納特。細胞生物學。7,21-29。 |
Falcon-Perez，JM，Starcevic，M.，Gautam，R。和Dell'Angelica，EC（2002）。BLOC-1，一種新的復合物，含有蒼白素和弱蛋白，參與黑素體和血小板致密顆粒的生物發(fā)生。J. Biol?；瘜W。277,28191-28199。 |
Zhai，L.，Zhao，P.，Panebra，A.，Guerrerio，AL和Khurana，S。（2001）。絨毛蛋白的酪氨酸磷酸化調節(jié)肌動蛋白細胞骨架的組織。J. Biol。化學。276,36163-36167。 |
Leung，CL，Sun，D.，Zheng，M.，Knowles，DR and Liem，RK（1999）。微管肌動蛋白交聯(lián)因子（MACF）：dystonin和肌營??養(yǎng)不良蛋白的雜合體，可與肌動蛋白和微管細胞骨架相互作用。J. Cell Biol。147,1275-1286。 |
G-Actin / F-actin體內檢測Biochem試劑盒（目錄號BK037） |
Rapier等，2010。癌細胞Int。10,24 |
Rapier等。（2010年）。細胞外基質微觀形成驅動結腸癌細胞中細胞運動性和Rho A活性的關鍵變化。癌細胞10,24。 |
Meeks，MK，Ripley，ML，Jin，Z。和Rembold，CM（2005）。熱休克蛋白20介導的力抑制毛喉素放松豬頸動脈。上午。J. Physiol。288，C633-639。 |
Zhang，W.，Wu，Y.，Du，L.，Tang，DD and Gunst，SJ（2005）。通過N-WASp激活Arp2 / 3復合物是肌動蛋白聚合和平滑肌收縮所必需的。上午。J. Physiol。288，C1145-1160。 |
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Tang，DD和Gunst，SJ（2004）。小GTP酶Cdc42在平滑肌的收縮刺激期間調節(jié)肌動蛋白聚合和張力發(fā)展。J. Biol?；瘜W。279,51722-51728。 |
Searles CD，Ide L，Davis ME，Cai H，Weber M（2004）。肌動蛋白細胞骨架組織和細胞生長過程中內皮細胞一氧化氮合酶的轉錄后調節(jié)。Circulation Research 95,488-495。 |
Tu，Y.，Wu，S.，Shi，X.，Chen，K。和Wu，C。（2003）。Migfilin和Mig-2將細絲蛋白和肌動蛋白細胞骨架的細胞粘連與細胞形狀調節(jié)功能聯(lián)系起來。細胞113,37-47。 |
問題1：哪種試劑盒是檢測肌動蛋白結合蛋白的*選擇？
答案1： Cytoskeleton有兩個肌動蛋白結合蛋白旋轉分析試劑盒，是識別和表征肌動蛋白結合蛋白的理想選擇。一個試劑盒使用肌肉肌動蛋白（Cat。＃BK001），另一個試劑盒使用非肌肉肌動蛋白（Cat。＃BK013）。兩種測定均利用共沉淀來鑒定蛋白質是否與單體或絲狀肌動蛋白結合以及蛋白質是否具有F-肌動蛋白切斷或成束特性。為了檢查與肌動蛋白單體結合的化合物或蛋白質，含有鏈霉抗生物素蛋白包被的孔的96孔板可以與生物素化肌動蛋白復合（Cat。＃AB07）產(chǎn)生肌動蛋白單體捕獲蛋白。然后可以將化合物，蛋白質或提取物與捕獲蛋白一起溫育，并且可以通過HRP檢測系統(tǒng)使用針對目標化合物或蛋白質的抗體（或標記可以與測試蛋白綴合）來顯現(xiàn)結合。請記住，緩沖液組成也很重要，因為它需要低鹽（約50 mM）并含有CaCl 2（或其他二價陽離子）和ATP以維持肌動蛋白單體的穩(wěn)定性。有關兼容緩沖液的示例，請參閱我們的一般肌動蛋白緩沖液配方（Cat。＃BSA01-001）?；蛘?，可以用GST標記感興趣的蛋白質（避免還原劑）并與板綴合，然后與生物素化的肌動蛋白一起溫育，并用HRP綴合的鏈霉抗生物素蛋白顯現(xiàn)。
問題2：當我對感興趣的肌動蛋白沒有可用的芘結合物（例如心臟，平滑肌或細胞質肌動蛋白）時，如何用芘測定法測量肌動蛋白聚合？
答案2： 為了檢查未標記肌動蛋白的聚合，請點擊此處查看使用過量未標記肌動蛋白（心肌，平滑肌或細胞質）加10％芘標記肌肉肌動蛋白的聚合方案。芘肌肉肌動蛋白不會以該測定中使用的濃度自身聚合，因此反應依賴于未標記的非肌肉肌動蛋白形成F-肌動蛋白。以這種方式，芘標記的肌肉肌動蛋白被吸收并聚合以充當用于聚合未標記的肌動蛋白的報道分子，其以更高的濃度存在。
問題3：如何從細胞或組織提取物中測量G-和F-肌動蛋白？
答案3： 確定細胞或組織樣本中游離球狀肌動蛋白（G-肌動蛋白）含量與絲狀肌動蛋白（F-肌動蛋白）含量的可重復和準確的方法是使用F-肌動蛋白和G-肌動蛋白部分的Western印跡定量。 。一般方法是使F-肌動蛋白穩(wěn)定緩沖液中的細胞或組織均質化，然后高速離心以將F-肌動蛋白與G-肌動蛋白池分離。然后通過SDS-PAGE分離級分，并通過Western印跡定量肌動蛋白。終結果給出了準確的方法來確定摻入細胞骨架的F-肌動蛋白與細胞質中發(fā)現(xiàn)的G-肌動蛋白的比例。細胞骨架提供了一種簡單易用的選擇，可用G-肌動蛋白/ F-肌動蛋白體內檢測試劑盒（Cat。＃BK037）定量G-和F-肌動蛋白。該試劑盒提供了在不同處理條件下定量細胞或組織樣品中單體和聚合肌動蛋白水平的所有必需試劑。將樣品離心，然后將沉淀（F-肌動蛋白）和上清液（G-肌動蛋白）溶解于SDS上樣緩沖液中并通過Western印跡處理。
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30-100 assays (Cat. # BK037)
窗體底端
產(chǎn)品用途包括
引言
確定細胞群中絲狀肌動蛋白（F-肌動蛋白）含量與游離球狀肌動蛋白（G-肌動蛋白）含量的可重復和準確的方法是使用F-actin和G-actin細胞的Western印跡定量分數(shù)（1-4）。一般方法是使F-肌動蛋白穩(wěn)定緩沖液中的細胞均質化，然后離心以將F-肌動蛋白與G-肌動蛋白池分離。然后通過SDS-PAGE分離級分，并通過Western印跡定量肌動蛋白。終結果給出了準確的方法來確定摻入細胞骨架的F-肌動蛋白與細胞質中發(fā)現(xiàn)的G-肌動蛋白的比例。該試劑盒包含進行該試驗所需的所有試劑。
試劑盒內容
該試劑盒包含足夠的材料，可根據(jù)分析設置進行30-100次分析，并包含陽性和陰性對照試劑。包括以下組件：
需要的設備
實施例結果
使用G-肌動蛋白/ F-肌動蛋白體內測定試劑盒，在用肌動蛋白聚合藥物jasplakinolide處理的Swiss 3T3細胞中研究了G-肌動蛋白和F-肌動蛋白量的變化。在未經(jīng)處理的瑞士3T3細胞中，80％的肌動蛋白是可溶性G-肌動蛋白，并且在上清液部分中發(fā)現(xiàn)，20％的肌動蛋白是絲狀F-肌動蛋白并且在沉淀部分中發(fā)現(xiàn)。在用jasplakinolide處理的Swiss 3T3細胞中，80％的肌動蛋白重組成F-肌動蛋白并且在沉淀部分中發(fā)現(xiàn)（圖1）。
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| 圖1.用jasplakinolide處理后瑞士3T3細胞中肌動蛋白的重組。瑞士3T3細胞用jasplakinolide（Jaspl）處理或不處理（Untr），并使用BK037測定G-肌動蛋白（G）和F-肌動蛋白（F）含量。用jasplakinolide治療導致F-肌動蛋白的有效積累。 |
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問題1：在哪個步驟可以停止檢測？
答案1： 直到在37℃下旋轉100,000xg 1小時后才能停止測定。在高速離心后，可將上清液（G-肌動蛋白）與SDS上樣緩沖液混合并冷凍備用。應使用解聚劑和水重懸沉淀（F-肌動蛋白），然后與SDS上樣緩沖液混合并冷凍備用。在冷凍時，F(xiàn)-肌動蛋白解聚，因此在冷凍樣品之前必須將F-肌動蛋白與G-肌動蛋白分離以分離樣品以準確測量F-肌動蛋白和G-肌動蛋白比率。
問題2：這種檢測有多敏感？
答案2： 該檢測方法可以檢測到G-肌動蛋白與F-肌動蛋白比例的15％變化。每個條件應一式兩份進行并重復幾次，因為實驗之間的測定再現(xiàn)性可以變化10-20％。
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參考
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
BK165-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK165 | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK163-S | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK163 | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK160-S | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK160 | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK162-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK162 | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK161-S | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK161 | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
AAC04-Beads | Acetyl-Lysine Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
APY03-Beads | Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
ASM11-Beads | SUMOylation 1 Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
ASM24-Beads | SUMOylation 2/3 Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
UBA01-Beads | Ubiquitination Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
CIG02-Beads | Acetyl-Lysine Control Beads | ea | cytoskeleton |
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BLR01 | BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit | ea | cytoskeleton |
BLR02 | BlastR™ Rapid Filtration Kit | ea | cytoskeleton |
AAC02 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1) | ea | cytoskeleton |
AAC03 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton |
AAC03-HRP | Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton |
AAC01 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20) | ea | cytoskeleton |
APY03 | Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton |
APY03-HRP | Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton |
ASM01 | SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16) | ea | cytoskeleton |
ASM24 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2) | ea | cytoskeleton |
ASM23 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton |
ASM23-HRP | SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton |
AUB01 | Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton |
AUB01-HRP | Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton |
PHDG1 | Acti-stain 488 phalloidin | ea | cytoskeleton |
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BK001 | Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton |
BK003 | Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton |
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AD99 | Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton |
AS99 | Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle | ea | cytoskeleton |
AKL99 | Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AKF99 | Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AP05 | Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
APHR | Actin protein (rhodamine): human platelet | ea | cytoskeleton |
AR05 | Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AT01 | Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
RP01P | Arp2/3 protein complex: porcine brain | ea | cytoskeleton |
CS-TFC01 | Cardiac Thin Filament Complex (CTFC) | ea | cytoskeleton |
CF01 | Cofilin 1 protein: human recombinant | ea | cytoskeleton |
HPG6 | Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant | ea | cytoskeleton |
MH01 | Heavy meromyosin protein | ea | cytoskeleton |
CS-MH03 | Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment) | ea | cytoskeleton |
CS-MYS03 | Myosin - cardiac S1 fragment | ea | cytoskeleton |
CS-MYS04 | Myosin - skeletal muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton |
CS-MYS05 | Myosin - smooth muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton |
MY02 | Myosin II protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
MY03 | Myosin protein: bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton |
PR02 | Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant | ea | cytoskeleton |
PHDR1 | Rhodamine Phalloidin | ea | cytoskeleton |
CY-SC001 | SiR-Actin Kit | ea | cytoskeleton |
CY-SC013 | SiR700-Actin Kit | ea | cytoskeleton |
VCG03 | WASP protein VCA domain: GST tagged: human | ea | cytoskeleton |
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