TGR BioSciences Pty Ltd（TGR）是一家位于澳大利亞阿德萊德的私營公司。TGR成立于2001年，致力于為基于細(xì)胞的研究應(yīng)用提供創(chuàng)新解決方案。我們的科學(xué)家擁有細(xì)胞生物學(xué)，生物化學(xué)和免疫測定設(shè)計(jì)方面的專業(yè)知識，并開發(fā)出高質(zhì)量的產(chǎn)品和服務(wù)，這些產(chǎn)品和服務(wù)已成功應(yīng)用于世界各地的藥物發(fā)現(xiàn)計(jì)劃。

TGR在其研發(fā)方面投入了大量資金，我們通過不斷提供新的細(xì)胞檢測方法來支持客戶的研究工作，以檢測疾病所依賴的細(xì)胞過程。TGR致力于營造持續(xù)學(xué)習(xí)和改進(jìn)的氛圍，以及高質(zhì)量的技術(shù)支持，為我們的客戶提供性能的產(chǎn)品。

為此，TGR憑借其獲得專項(xiàng)的CaptSure™技術(shù)為其核心產(chǎn)品奠定了基礎(chǔ)。這種創(chuàng)新的抗體固定系統(tǒng)提供了更快速，更簡單的免疫測定，以及顯著降低制造成本的好處。此外，我們開發(fā)了CaptSure™Multiplex，用于分析單個樣品中的多個目標(biāo)。除了在自己的產(chǎn)品中使用CaptSure™之外，TGR還與其他公司合作，根據(jù)許可安排訪問該技術(shù)。

我們的旗艦免疫檢測系列SureFire®是一系列用于分析細(xì)胞磷蛋白的檢測試劑盒，由我們位于阿德萊德的工廠生產(chǎn)。SureFire和SureFire Ultra試劑盒通過PerkinElmer，Inc。（美國）分銷，PerkinElmer，Inc。是實(shí)驗(yàn)室試劑的市場領(lǐng)先者。SureFire和SureFire Ultra檢測器目前提供100多種SureFire試劑盒，可提供的工具箱，用于以均質(zhì)形式測量內(nèi)源性信號蛋白。

TGR的ELISAONE™是一種高靈敏度的免疫分析技術(shù)，無需標(biāo)準(zhǔn)ELISA應(yīng)用所需的所有處理步驟即可提供快速結(jié)果。ELISAONE還為該平臺帶來了靈活性，允許用戶使用標(biāo)準(zhǔn)讀板器在單個96孔板上測量多個靶標(biāo)。ELISAONE代表ELISA技術(shù)的下一代產(chǎn)品，現(xiàn)已通過我們的分銷合作伙伴在美國和加拿大銷售。

AlphaSureFire®Ultra™Multiplex

與PerkinElmer合作，我們自豪地推出AlphaSureFire®Ultra™ Multiplex檢測產(chǎn)品組合，這是僅可用的磷脂蛋白多路檢測平臺，具有真正的同質(zhì)性和高通量。雖然初的多重測定引入（MPSU試劑盒）僅??包括用于測量磷酸化和總ERK或AKT蛋白的幾個試劑盒，但是多重化試劑組的新添加允許從銪和一組銪中選擇單個磷酸化靶標(biāo)?；阡埖膯为?dú)試劑并根據(jù)需要組合。這種拾取和包裝功能允許科學(xué)家選擇感興趣的雙重目標(biāo)，以便在實(shí)驗(yàn)室中輕松實(shí)施。

Alpha SureFire Ultra Multiplex檢測分為兩類（1）Multiplex SureFire Ultra（MPSU）試劑盒和（2）Terbium SureFire Ultra（TBSU）試劑盒。MPSU試劑盒是用于磷酸化和*檢測相同靶標(biāo)的完整試劑盒，而TBSU試劑盒測量單個磷蛋白靶標(biāo)，并且旨在與標(biāo)準(zhǔn)AlphaLISA SureFire Ultra試劑盒（ALSU）組合以評估第二個靶標(biāo)。TBSU試劑盒允許在測定列表中對任何兩種磷蛋白靶標(biāo)進(jìn)行拾取和包裝組合，提供兩種獨(dú)立靶標(biāo)的測量，具有大的選擇靈活性。TBSU試劑盒將通過鋱（Tb）受體珠報告目標(biāo)，而ALSU試劑盒通過銪（Eu）AlphaLISA受體珠報告。

分析原則

阿爾法  神火 ®  超 ™多重磷酸+總測定試劑盒和磷酸+磷酸測定試劑盒（剛剛發(fā)布）允許快速，靈敏，和定量地檢測從細(xì)胞中磷酸化的，具有相同的蛋白質(zhì)或總量的測量組合第二種磷蛋白。該Alpha Multiplex測量在相同的測定板孔中從單個細(xì)胞裂解物樣品中進(jìn)行，并且通過使用兩種類型的Alpha受體珠實(shí)現(xiàn)，所述Alpha受體珠在不同波長（545nm和615nm）發(fā)射。

如下所示，兩種不同的Alpha受體珠通過與特異性測定抗體的結(jié)合報告它們與不同抗原的結(jié)合。

單個目標(biāo) - Phospho + Total Assay試劑盒（MPSU試劑盒）

Alpha 615（銪）受體珠與靶蛋白上磷酸化位點(diǎn)的抗體直接綴合。Alpha 545（鋱）受體珠子涂有Capt Sure™  試劑，該試劑結(jié)合Capt Sure  標(biāo)記的抗總靶蛋白抗體。Alpha供體珠結(jié)合生物素化的抗總靶蛋白抗體。

雙靶分析試劑盒（將ALSU試劑盒與TBSU試劑盒結(jié)合使用）

ALSU試劑盒中的Alpha 615（銪）受體珠與Capt Sure TM  試劑抗體綴合至靶蛋白上的位點(diǎn)。TBSU試劑盒中的Alpha 545（鋱）受體珠用新開發(fā)的Capt Sure2試劑抗體包被，該抗體結(jié)合 第二靶蛋白的Capt Sure2標(biāo)記的抗靶抗體。Alpha供體珠子結(jié)合靶蛋白質(zhì)1和2的兩種生物素化抗體。

在存在靶蛋白的情況下，抗體使供體和受體珠子緊密接近，使得能夠通過具有Alpha功能的讀板器照射供體珠子時產(chǎn)生α信號。光發(fā)射量與樣品中存在的目標(biāo)蛋白質(zhì)的量成正比。

Alpha技術(shù)消除了對費(fèi)力技術(shù)的需求，例如Western印跡或常規(guī)ELISA。它是一種無需洗滌步驟的均相分析，結(jié)合較短的孵育時間和出色的重現(xiàn)性（較低的CV％），非常適合機(jī)器人自動化。

該測定法使用基于珠子的Alpha技術(shù)，并且需要能夠讀取雙發(fā)射波長的Alpha技術(shù)兼容的讀板器。  

測量磷酸和總蛋白質(zhì)目標(biāo)：

用于測量磷酸+總ERK和磷酸+總AKT的MPSU試劑盒現(xiàn)已上市。這些試劑盒包含進(jìn)行測定的所有試劑。

兩種磷蛋白靶標(biāo)的測量：

將ALSU套件與TBSU套件組合使用

ALSU試劑盒和TBSU試劑盒分別購買特定的磷酸化靶標(biāo)，并結(jié)合測量所需的duoplex組合。TBSU試劑盒手冊中提供了試劑盒組合的方案。

因此，可以選擇超過900種可能的雙磷蛋白組合用于該靈活系統(tǒng)的測量。這在下圖中示意性地示出。

請聯(lián)系PerkinElmer獲取化驗(yàn)盒詳細(xì)信息，AlphaPlex讀數(shù)的讀板優(yōu)化以及當(dāng)前套件組合的完整詳細(xì)信息。

資源

示例數(shù)據(jù) - MPSU套件

同時測量每個孔中的p-AKT（Ser473）和總AKT

將MCF-7細(xì)胞以200K / mL在200mL MEM + 10％FCS中鋪板過夜。然后用MEM + 1％FBS中不同濃度的渥曼青霉素處理細(xì)胞2小時，然后用2.5mg / mL胰島素刺激30分鐘（每種條件n = 3）。將每個孔在100mL  SureFire Ultra 裂解緩沖液中裂解，并使用Alpha SureFire Ultra Multiplex試劑盒同時測定10μL等分試樣的每種裂解物的p-AKT 1/2/3（Ser473）和總AKT1  。

同時測量每個孔中的p-ERK和總ERK

將A431細(xì)胞以200K / mL在200mL MEM + 10％FCS中鋪板過夜。然后將細(xì)胞血清饑餓2小時，然后用不同濃度的EGF刺激10分鐘（每種條件n = 3）。將每個孔在100mL  SureFire Ultra 裂解緩沖液中裂解，并使用Alpha SureFire Ultra  Multiplex試劑盒同時測定10μL等分試樣的每種裂解物的p-ERK和總ERK  。

示例數(shù)據(jù) - 將ALSU套件與TBSU套件組合使用

雙磷蛋白檢測

用抑制劑處理后A431細(xì)胞中MEK1和ERK磷酸化的多重分析。 在用抑制劑處理然后刺激后，使用標(biāo)準(zhǔn)ALSU測定試劑盒測量磷酸化MEK1的水平，同時使用TBSU測定試劑盒測量磷酸化ERK水平。

MCF-7細(xì)胞中蛋白質(zhì)磷酸化的多重分析。用mTOR抑制劑雷帕霉素處理細(xì)胞，然后用胰島素刺激。通過ALSU和通過TBSU測量的p-AKT 1/2/3（Ser473）水平測量p-p70S6k（Thr389）的水平。

HeLa細(xì)胞蛋白磷酸化多重分析及總Cofiin標(biāo)準(zhǔn)化。

用EGF受體抑制劑AG1478預(yù)處理或不用EGF處理HeLa細(xì)胞。除去培養(yǎng)基，用1X SureFire Ultra裂解緩沖液裂解細(xì)胞。通過將用于p-ERK 的AlphaLISA SureFire Ultra（ALSU）測定試劑盒和用于Total Cofilin 的Terbium SureFire Ultra（TBSU）測定試劑盒組合制備多重受體混合物。

已經(jīng)開發(fā)出Total Cofilin TBSU試劑盒，以允許使用ALSU試劑盒測量的所有磷蛋白靶標(biāo)分析的duoplexed標(biāo)準(zhǔn)化。

TBSU檢測試劑盒清單

AlphaScreen SureFire STAT3 (p-Tyr705) Assay Kit

Phospho-SYK (Tyr525/526) Terbium SureFire Ultra Detection Kit

Phospho-SMAD3 (Ser423/425) Terbium SureFire Ultra Detection Kit

Phospho-p70 S6K (Thr389) Terbium SureFire Ultra Detection Kit

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