ArcticZymes將利用其在北極海洋中的生物勘探活動(dòng)，成為分子研究和診斷新型冷適應(yīng)酶商業(yè)化的。

ArcticZymes 71800-100說(shuō)明書(shū)

T4 DNA連接酶

• 描述

T4 DNA連接酶是一種依賴(lài)ATP和Mg ^2+的 dsDNA連接酶，可催化雙鏈DNA，雙鏈RNA和某些DNA / RNA雜交中3'-羥基和5'-磷酸末端之間的磷酸二酯鍵的形成。T4 DNA連接酶在平末端和內(nèi)聚末端底物上均具有活性。

T4 DNA連接酶

總覽

T4 DNA連接酶是一種依賴(lài)ATP和Mg ^2+的 dsDNA連接酶，可催化雙鏈DNA，雙鏈RNA和某些DNA / RNA雜交中3'-羥基和5'-磷酸末端之間的磷酸二酯鍵的形成。T4 DNA連接酶在平末端和內(nèi)聚末端底物上均具有活性。

這是T4 DNA連接酶的高質(zhì)量（商業(yè)級(jí)）版本。T4 DNA連接酶在大腸桿菌中重組產(chǎn)生。ArcticZymes的T4 DNA連接酶經(jīng)過(guò)了廣泛的測(cè)試，能夠污染DNase和RNase活性以及殘留的宿主細(xì)胞gDNA。

T4 DNA Ligas中的大腸桿菌 gDNA 污染

圖1：T4 DNA Ligases通常含有大腸桿菌 gDNA。分析了ArcticZymes的T4 DNA連接酶和四種市售的T4 DNA連接酶（5000個(gè)單位）是否污染了大腸桿菌 gDNA。在兩個(gè)商業(yè)連接酶中檢測(cè)到了大腸桿菌 gDNA。使用基于探針的qPCR分析，一式三份進(jìn)行分析。

性質(zhì)

單位定義：  一個(gè)單位的定義是在總反應(yīng)體積為5％的情況下，對(duì)λDNA的2322和2927 bp HindIII片段進(jìn)行75％連接（5´DNA末端濃度為0.12 µM，300 µg / ml）所需的酶量。在16°C下30分鐘內(nèi)于50 mM Tris-HCl（pH 7.5），10 mM MgCl _2、1 mM ATP和10 mM DTT中20μl。

一個(gè)Weiss單位約等于500 ArcticZymes單位。

滅活：通過(guò)在70°C下孵育10分鐘，可以*滅活T4 DNA連接酶。

儲(chǔ)存和穩(wěn)定性

該酶在提供的存儲(chǔ)緩沖液中在-20°C穩(wěn)定1年以上。

該酶可耐受至少四個(gè)凍融循環(huán)（-80°C）而不會(huì)喪失活性。

質(zhì)量控制

ArcticZymes致力于提高產(chǎn)品質(zhì)量。T4 DNA連接酶是在挪威的ISO 13485認(rèn)證工廠(chǎng)生產(chǎn)的。

dsDNA核酸內(nèi)切酶活性

將10,000 U T4 DNA連接酶與超螺旋質(zhì)粒（1 µg）在37°C下孵育4小時(shí)。瓊脂糖凝膠電泳未顯示出封閉的環(huán)狀DNA向有切口的DNA的任何轉(zhuǎn)化。

ssDNA核酸內(nèi)切酶活性

將10,000 U T4 DNA連接酶與M13 ssDNA（0.5 µg）在37°C下孵育4小時(shí)。瓊脂糖凝膠電泳未顯示任何可見(jiàn)的ssDNA降解跡象。

核酸外切酶活性

將10,000 U T4 DNA連接酶與³ H-dATP標(biāo)記的ds或ssDNA（0.5 µg，500 bp）在37°C 下孵育4小時(shí)。對(duì)于任何一種底物，標(biāo)記DNA的酸溶放射性均未超過(guò)空白測(cè)試。

RNase活性

將5000 U T4 DNA連接酶與2 kb RNA轉(zhuǎn)錄物（0.5 µg）在37°C下孵育4小時(shí)。瓊脂糖凝膠電泳未發(fā)現(xiàn)任何可見(jiàn)的RNA降解跡象。

大腸桿菌 gDNA污染

在基于探針的qPCR分析中分析了5000 U T4 DNA連接酶，檢測(cè)了大腸桿菌中的23S核糖體亞基。無(wú)大腸桿菌的gDNA可以檢測(cè)（LOD：<3 大腸桿菌基因組拷貝）。