zeptometrix 0801198說(shuō)明書

Bovine IgG ELISA (96 Determinations)

CATALOG# 0801198

預(yù)期用途

牛IgG-ELISA試劑盒是一種快速、簡(jiǎn)便的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法

用于牛初乳、牛奶、血清、血漿或其他生物液體中牛IgG的測(cè)定?；?yàn)結(jié)果包括

大部分是現(xiàn)成的試劑，使用不到兩個(gè)小時(shí)。試劑盒中的微孔板和檢測(cè)抗體

與牛IgG的所有亞類反應(yīng)一致。

免疫-TEK牛IgG-ELISA試劑盒僅供研究使用。

試驗(yàn)原理

涂有牛IgG多克隆抗體的微孔板形成了檢測(cè)的捕獲階段。這些抗體

與牛IgG的所有亞類均勻結(jié)合。捕獲的牛IgG然后與檢測(cè)抗體反應(yīng)，檢測(cè)抗體是

與牛辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合的多克隆抗牛IgG。該試劑也與所有

牛IgG的亞類。然后，以四甲基聯(lián)苯胺為底物，對(duì)井中的酶活性進(jìn)行定量。

試劑

提供的材料：

•微孔板（1x96孔）：涂有純化山羊抗牛IgG的條帶

檢測(cè)抗體（12毫升）：含有共軛山羊抗牛IgG過(guò)氧化物酶

•牛IgG標(biāo)準(zhǔn)品（7 mL）：含牛IgG和檢測(cè)稀釋液

•分析稀釋劑（100毫升）：含有PBS、Triton X-100®和2-氯乙酰胺

•洗板緩沖液（125毫升）：含有PBS、吐溫20®和2-氯乙酰胺

•底物（12毫升）：含有四甲基聯(lián)苯胺（TMB）

•停止溶液（12毫升）：專有配方

•微孔板密封劑（1 pk）：每包10個(gè)密封劑

•塑料袋（1袋）：用于儲(chǔ)存未使用的微孔板條

？Triton X-100是Union Carbide Chemicals and Plastics Co.，Inc.的注冊(cè)商標(biāo)。Tween 20是帝國(guó)化學(xué)工業(yè)的注冊(cè)商標(biāo)

需要但未提供的材料：

•一次性手套

•用于制備樣品和IgG標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的試管和試管架

•經(jīng)驗(yàn)證的單通道和多通道可調(diào)微量吸管

•蒸餾水或去離子水

•經(jīng)驗(yàn)證的培養(yǎng)箱能夠保持37℃+1℃

•量筒和各種燒杯

•經(jīng)驗(yàn)證的微量滴定板閱讀器

•自動(dòng)微量滴定板清洗機(jī)或手動(dòng)真空抽吸設(shè)備

•計(jì)時(shí)器

儲(chǔ)存

將所有試劑盒儲(chǔ)存在2-8°C。不要冷凍。未使用的微孔板條應(yīng)保存在密封袋中，并用干燥劑

盡量減少暴露在濕氣中。所有儲(chǔ)存和妥善處理的試劑都是穩(wěn)定的，至少在到期日之前

工具箱標(biāo)簽。

注意事項(xiàng)

僅供研究使用。不用于診斷程序。

•在進(jìn)行分析之前，仔細(xì)閱讀所有說(shuō)明。

•在處理套件組件和試樣時(shí)使用通用預(yù)防措施*

•為避免交叉污染，對(duì)每個(gè)樣本使用單獨(dú)的移液管。

•在測(cè)試潛在感染性樣本時(shí)，遵守所有適用的地方、州和聯(lián)邦法規(guī)

生物危險(xiǎn)品的處置。

•停止液中含有鹽酸，可能導(dǎo)致嚴(yán)重?zé)齻?。如果接觸到眼睛或皮膚，請(qǐng)沖洗

立即用水并尋求醫(yī)療救助。穿防護(hù)服和護(hù)目鏡。

*《海洋資源綜合報(bào)告》，1988年6月24日，第37卷，第24期，第377-382、387-388頁(yè)

試劑的制備

洗板緩沖器

使用前，用蒸餾水或去離子水稀釋10倍洗板緩沖液1:10。充分混合。準(zhǔn)備1X洗板緩沖液

可在2-8℃下儲(chǔ)存一周。如有以下情況，可訂購(gòu)額外的10倍洗板緩沖液（ZMC目錄#：0801060）

需要。

牛IgG標(biāo)準(zhǔn)曲線

如表所示，給6個(gè)試管貼上標(biāo)簽。牛IgG標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為125ng/mL，應(yīng)在分析時(shí)稀釋

稀釋如下以制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品稀釋

牛初乳通常含有50-80毫克/毫升的IgG抗體。牛初乳1:1000000稀釋試驗(yàn)

初次試驗(yàn)推薦使用稀釋劑。

牛乳通常含有約0.5mg/mL的IgG抗體。初次試驗(yàn)時(shí)，建議使用1:10000稀釋的試驗(yàn)稀釋液稀釋牛乳。

牛血清通常含有25-30毫克/毫升的IgG抗體。初次試驗(yàn)時(shí)，建議使用1:500000稀釋的試驗(yàn)稀釋液稀釋牛血清。

試驗(yàn)程序

使用前讓所有試劑達(dá)到室溫。對(duì)用于制備標(biāo)準(zhǔn)品和試樣的試管貼上標(biāo)簽。如果不使用整個(gè)96孔板，從板架上取下多余的板條，并用干燥劑放入可重新密封的塑料袋中。密封袋并在2-8°C下儲(chǔ)存。

步驟1：在每個(gè)板條的末端標(biāo)簽上貼上標(biāo)簽，以確保在

化驗(yàn)。

第2步：用移液管將200μl標(biāo)準(zhǔn)品1-6移到兩個(gè)孔中。

第3步：用移液管將每個(gè)樣品200μl移到兩個(gè)孔中。

步驟4：用封板器蓋住微孔板，在37℃下孵育30分鐘。

第五步：吸出每口井的內(nèi)容物，用1個(gè)洗板緩沖液清洗4次。洗的時(shí)候，把井灌滿

300μl 1X洗板緩沖液并抽吸。執(zhí)行4次加注/吸氣循環(huán)。在后一次清洗循環(huán)后，*清洗

小心地在一塊吸水紙巾上敲擊盤子，以吸干盤子。繼續(xù)，直到?jīng)]有可見(jiàn)的液滴

觀察洗板緩沖。

第6步：用移液管將100μl檢測(cè)抗體移到每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中。

不要在基質(zhì)空白處加入檢測(cè)抗體。

第7步：用封板器蓋住板，在37℃下孵育30分鐘。

步驟8：使用步驟6所述的洗板緩沖液洗板4次。

第9步：用吸管將100μl基質(zhì)吸進(jìn)每個(gè)孔，包括基質(zhì)空白孔。

第十步：在室溫下孵育30分鐘。含有牛IgG的井中會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色。

第11步：用移液管將100μl停止液移到每個(gè)孔中。將發(fā)生從藍(lán)色到黃色的顏色變化。

第12步：在15分鐘內(nèi)，用微量滴定板閱讀器在450 nm處讀取每個(gè)孔的光密度。

預(yù)期結(jié)果

下面是標(biāo)準(zhǔn)曲線的示例，不應(yīng)用于計(jì)算實(shí)際樣本?？梢杂^察到變化

由于移液管、培養(yǎng)箱溫度、讀板器等原因，從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室。

計(jì)算結(jié)果

測(cè)試有效期：

•為了使試驗(yàn)有效，0 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品和基底空白的平均光密度必須低于0.200。

•125 ng/ml的平均光密度必須大于1.000。

•當(dāng)平均光密度值不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)時(shí)，建議用較大或較小的稀釋度重新分析樣品。

計(jì)算：

一。計(jì)算每組標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋樣品的平均光密度（OD）值。

2。使用線性圖形紙或繪圖軟件，繪制每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)在Y軸上的平均OD值與X軸上相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)濃度。

三。通過(guò)這些點(diǎn)繪制宜擬合曲線以構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。在大多數(shù)情況下，線性回歸圖是足夠的，但對(duì)于準(zhǔn)確的結(jié)果，使用點(diǎn)對(duì)點(diǎn)或4參數(shù)logistic回歸。

四。用標(biāo)準(zhǔn)曲線插值法測(cè)定每個(gè)稀釋樣品的IgG濃度。

5個(gè)。乘以用于稀釋每個(gè)樣品的稀釋系數(shù)，以確定原始樣品的IgG濃度。

PROCEDURAL FLOW CHART