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當(dāng)前位置:首頁(yè)技術(shù)文章Fluoro-Gold

Fluoro-Gold

更新時(shí)間:2020-06-01點(diǎn)擊次數(shù):3548

 

Fluoro-Gold™是世界上使用廣泛,有效的神經(jīng)元逆行示蹤劑。氟金,商品名Fluoro-Gold,也稱為羥基二苯乙烯am。

 

我們的氟金抗體是迄今為止有效的氟金抗體。自從Fluorochrome在1998年*推出以來,它已取得了*的成就記錄,并已成為行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

Fluoro-Ruby是一種快速,靈敏,可靠且技術(shù)簡(jiǎn)單的熒光順行示蹤劑和標(biāo)記物。氟紅寶石的使用與氟金基本相同。Fluoro-Ruby已經(jīng)使用了很多年,被認(rèn)為是領(lǐng)跑的順行示蹤劑。

 

 

氟金

DAPI染色的縱截面的顯微照片,通過小鼠右頸脊髓,顯示了熒光金標(biāo)記的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的典型列。該圖發(fā)布于Tosolini AP,Mohan R,Morris R(2013)。靶向小鼠前肢中運(yùn)動(dòng)終板區(qū)域的全長(zhǎng)可增加氟金對(duì)相應(yīng)脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的吸收。面前。神經(jīng)元。4:58、1-10、4

大鼠前肢中強(qiáng)烈的熒光金標(biāo)記的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元陽(yáng)性。該圖發(fā)表于Tosolini AP,Mohan R(2012)。供應(yīng)大鼠前肢的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元柱的空間表征。神經(jīng)科學(xué)200:19-30,22。

成年小鼠腰脊髓的顯微照片,顯示了用DAPI復(fù)染色的典型的熒光金標(biāo)記柱。該圖發(fā)表于Mohan R,Tosolini AP,Morris,R.(2014)。神經(jīng)科學(xué)274:318-330,323

 

使用指南和協(xié)議

氟金使用指南和協(xié)議

杏仁核40X

主協(xié)議


1.背景
熒光金的使用與其他熒光示蹤劑基本相同。氟金在注射后的存活時(shí)間,濃度范圍,組織治療以及與其他組織化學(xué)技術(shù)的相容性方面更具靈活性。

2.儲(chǔ)存和保質(zhì)期
干氟金應(yīng)保存在4攝氏度的密閉容器中。妥善存放,氟金的保質(zhì)期應(yīng)超過一年。溶液中的染料也應(yīng)保存在4攝氏度的密閉容器中,并應(yīng)保持穩(wěn)定至少六個(gè)月。

3.車用
氟金可以溶于蒸餾水或0.9%的鹽水中。氟金在堿性pH下不溶。但是,它也可以用作 0.2M中性磷酸鹽緩沖液的懸浮液。

4.染料濃度
氟金已成功使用,濃度范圍為1-10%。建議濃度為4%。如果在注射部位發(fā)生不良?jí)乃溃驑?biāo)記太強(qiáng)烈,請(qǐng)將濃度降低至2%溶液。如果您需要使用更精確的測(cè)量值,則Fluoro-Gold的分子量為532.6道爾頓。

5.染料管理

  • A.壓力注入  –這可能是常用的應(yīng)用模式。進(jìn)樣量為.05-1 µl,通常為.1-.2 µl。
  • B.離子  電滲療法– 4-10秒脈沖離子電滲療法(+5至+ 10ua / 10min)的應(yīng)用導(dǎo)致離散的小注射部位。
  • C.晶體  –示蹤劑的晶體可以從微量移液器的進(jìn)行管理。
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6.術(shù)后0生存期
已觀察到良好的逆行標(biāo)記,周期從兩天到兩個(gè)月不等。生存期通常為三到五天。較長(zhǎng)的生存期可增強(qiáng)遠(yuǎn)端過程的填充,而不會(huì)使染料從細(xì)胞中擴(kuò)散出來。

7.固定
劑幾乎可以使用任何固定劑,也可以不使用固定劑,含有4%甲醛的磷酸鹽中性緩沖鹽水經(jīng)常使用。含有高濃度重金屬(例如,汞)的固定劑會(huì)猝滅熒光,而高濃度(超過1%)的戊二醛可能會(huì)增加背景熒光。

8.
含有氟金的組織化學(xué)處理組織實(shí)際上可以根據(jù)任何常見的組織學(xué)技術(shù)進(jìn)行處理。其中包括未固定組織的低溫恒溫器切片(10 µm),固定組織的冷凍切片(20 µm)和從嵌入塑料(.2-4 µm)或石蠟(3-10 µm)中的組織切下的薄切片。常使用固定組織的冷凍切片。

9.組合方法
在處理的這一點(diǎn)上,可以對(duì)切片進(jìn)行進(jìn)一步處理,以用于第二標(biāo)記物,例如放射自顯影,HRP組織化學(xué),免疫細(xì)胞化學(xué),第二熒光示蹤劑,熒光復(fù)染色等。

10.安裝,清理和蓋玻片
部分通常安裝在涂明膠的載玻片上,風(fēng)干,浸入二甲苯中,并用非熒光DPX塑料固定介質(zhì)蓋玻片。切片可能會(huì)用分級(jí)酒精脫水,除非這與第二種示蹤劑不兼容。如果將Fluoro-Gold與熒光免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)合使用,則將切片風(fēng)干并直接用中性緩沖甘油(1:2)蓋上蓋子。

11.考試與攝影
熒光金可以使用寬帶紫外激發(fā)濾光片在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)用中性pH緩沖液處理組織時(shí),發(fā)出金色,而當(dāng)用酸性(例如pH 3.3)pH緩沖液處理組織時(shí),發(fā)出藍(lán)色。它可以用數(shù)碼照片或膠片照相(對(duì)于彩色照片,請(qǐng)使用Ektachrome 200-400 ASA膠片;對(duì)于黑白照片,請(qǐng)使用相當(dāng)?shù)乃俣饶z片,例如Tri-X)。根據(jù)物鏡的放大倍數(shù)和標(biāo)簽的強(qiáng)度,大多數(shù)曝光時(shí)間為10-60秒。三十(30)秒鐘的暴露約為平均水平。可以利用多次曝光來同時(shí)可視化熒光金和另一種示蹤劑。從而,紫外線將與明場(chǎng)照明相結(jié)合,以在放射自顯影中同時(shí)定位具有HRP或銀顆粒的氟金。類似地,可以組合使用藍(lán)光激發(fā)以可視化FITC的綠色發(fā)射顏色,而可以使用綠色激發(fā)光同時(shí)觀察碘化丙啶或溴化乙錠(熒光復(fù)染)的紅色發(fā)射顏色。

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氟金(Fluorogold)是Fluorochrome,LLC的產(chǎn)品。自1985年以來,它已由Fluorochrome出售并得到廣泛使用。其他公司正在銷售他們聲稱與Fluoro-Gold相同或等同的產(chǎn)品。實(shí)際上,這些化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)似乎不同于氟金?;衔锏哪承┪锢硇再|(zhì)可能會(huì)非常不同。

 

 

 

 

 

 

 

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