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當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章HTI glu-纖溶酶原

HTI glu-纖溶酶原

更新時間:2020-07-03點擊次數(shù):1729

HTI glu-纖溶酶原,lys-纖溶酶原和碳水化合物變體

 

人纖溶酶原人纖溶酶原
的域結(jié)構(gòu)表示如下:K1-K5 = 5個kringle域,B-CHAIN =纖溶酶的催化域,箭頭指示纖溶酶,彈性蛋白酶和纖溶酶原激活劑(PA'S)的蛋白水解切割位點。 。

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    存儲-20°攝氏度
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    公式50%甘油/水(v / v)
    存儲-20°攝氏度
    純度通過SDS-PAGE,> 95%
    活性測定<100 ppm纖溶酶活性
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纖溶酶原是在肝臟中合成的單鏈糖蛋白酶原,在血漿中循環(huán)的濃度約為2.4 µM(1,2)。纖溶酶原分子包含790個氨基酸,24個二硫鍵,無游離巰基以及Lys77和Arg560之間的5個內(nèi)部序列同源性區(qū)域,稱為kringles。這五個三環(huán),三個二硫鍵橋接的kringle區(qū)與t-PA,u-PA和凝血酶原中的kringle結(jié)構(gòu)域同源。纖溶酶原包含一個高親和力(Kd = 9x10-6M)和四個低親和力(Kd = 5x10-3M)賴氨酸結(jié)合位點。高親和力結(jié)合位點位于纖溶酶原的kringle區(qū)域內(nèi)。纖溶酶原與纖維蛋白和α2-抗纖溶酶的相互作用是由這些賴氨酸結(jié)合位點介導(dǎo)的。天然的glu-纖溶酶原(Mr = 88,000)通過纖溶酶水解Lys76-Lys77肽鍵而容易地轉(zhuǎn)化為Lys-77-纖溶酶原(Mr = 83,000)。彈性蛋白酶催化的glu-纖溶酶原的Val441-Val442肽鍵的裂解產(chǎn)生稱為Val-442纖溶酶原或微纖溶酶原的功能活性酶原。

纖溶酶原向纖溶酶的轉(zhuǎn)化通過多種機制發(fā)生,但是全部導(dǎo)致纖溶酶原的Arg560-Val561肽鍵水解,產(chǎn)生兩條通過二硫鍵保持共價結(jié)合的鏈。

通過對Castellino(3)的程序進行修改,利用凝膠過濾和親和色譜法,從新鮮的冷凍人血漿中制備天然glu-纖溶酶原。通過使用賴氨酸類似物e-氨基己酸(3)從賴氨酸-瓊脂糖中進行梯度洗脫,分離出了glu-纖溶酶原的兩個碳水化合物變體(CHOI和CHOII)。纖溶酶原以50%(體積/體積)甘油/ H2O的形式供應(yīng),可在-20oC下儲存。通過SDS-PAGE分析確定純度。

glu-Plasminogen, lys-Plasminogen and carbohydrate variants

 

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