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更新時間：2021-05-20
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-糖苷內切酶可從糖蛋白上裂解完整的聚糖-
在清潔制劑中具有高度穩(wěn)定的酶-不含甘油，NaCl或其他添加劑（如EDTA）。
-測試所有酶是否沒有蛋白水解或意外的糖苷活性
糖苷內切酶是糖蛋白分析中使用*泛的一些酶。這些酶從糖蛋白中釋放出完整的聚糖，而外切糖苷酶則釋放出單個的單糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰葡糖胺，甘露糖等）。
盡管PNGase F實際上是酰胺酶，但由于它具有類似的裂解完整的N-連接聚糖的活性，因此通常被包括在酶組中。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的ß-N-乙酰氨基葡糖糖（GlcNAc）之間裂解。Endo F酶和Endo H在第一個和第二個GlcNAc之間裂解N-連接的聚糖，留下親水殘基，這有助于增加去糖基化蛋白質的溶解度，減少蛋白質聚集物沉淀的可能性。PNGase F裂解所有N-連接的聚糖，而Endo H和Endo F酶則去除特定類型的N-連接的聚糖。PNGase F不會去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現的含有與α-（1,3）連接的核心巖藻糖的寡糖。
O-糖苷酶也包括在這種酶的分類中，其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中去除了核心1 O-連接的聚糖（Gal-β1,3-GalNAc）。通常，O-連接的聚糖含有在分支和線性連接中均與半乳糖連接的另外的單糖，需要使用外切糖苷酶，例如唾液酸酶和半乳糖苷酶來除去另外的糖。
PNGase F從糖蛋白上裂解N-連接（天冬酰胺連接）的寡糖。
酶在37°C時保持*活性至少96小時。
查看產品文檔：
Specsheet CofA SDS
部件號–酶的量
E-PNG01 – 60 µLs¹
E-PNG01-20 – 20 µLs¹
E-PNG01-200 – 200 µls²（以前為E-PNG05）
¹包含緩沖液，變性劑，Triton-
X²僅包含酶
PNGase F從糖蛋白上裂解N-連接（天冬酰胺連接）的寡糖。
酶在37°C時保持*活性至少96小時。
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E-PNG01 – 60 µLs¹
E-PNG01-20 – 20 µLs¹
E-PNG01-200 – 200 µls²（以前為E-PNG05）
¹包含緩沖液，變性劑，Triton-
X²僅包含酶
PNGase F從糖蛋白上裂解N-連接（天冬酰胺連接）的寡糖。
酶在37°C時保持*活性至少96小時。
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X²僅包含酶
PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-糖苷酶
PNGase F從糖蛋白上裂解N-連接（天冬酰胺連接）的寡糖。該酶將天冬酰胺脫氨為天冬氨酸，使寡糖保持完整。PNGase F不會去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現的含有Alpha-（1,3）連接的核心巖藻糖的寡糖；為此，請使用肽N-糖苷酶A。
變性增加了切割速率。大多數天然蛋白質仍可以*被N-去糖基化，但是孵育時間可能需要增加。該酶在反應條件（37°C）下將保持*活性至少96小時。
有許多替代酶可用于去除N-聚糖，尤其是Endo F家族的酶和EndoH。這些酶在寡糖核心的兩個N-乙酰氨基葡萄糖殘基之間裂解，生成截短的糖分子上具有一個N-乙酰氨基葡糖殘基殘留在天冬酰胺上。這樣可以提高溶解度，將蛋白質保留在溶液中，然后用PNGase F進行糖基去糖基化處理后沉淀出來，這樣就可以完整清除寡糖。遠藤F1裂解高甘露糖和一些雜合型N聚糖。Endo F2將消除雙天線和高甘露糖（降低40倍的速率）。內三醇和巖藻糖基化雙觸角N-聚糖的Endo F3釋放。遠藤H 去除雜質和高甘露糖聚糖。
來源 Elizabethkingia miricola（曾是Meningosepticum的Chryseobacterium meningosepticum）
EC 3.5.1.52 PDB 1PGS UniProt Q9XBM8
pH 7.5的20 mM Tris-HCl中的PNGase F含量
包括20 µL和60 µL的包裝大?。?/font>
5倍反應緩沖液7.5 – 250 mM磷酸鈉，pH 7.5
變性溶液– 2％SDS，1 M Beta-巰基乙醇
Triton X-100 – 15％溶液
比活度> 25 U / mg
活性5 U / ml
分子量35,000道爾頓
pH范圍6-10，最佳7.5
方案
1.在Eppendorf管中加入200 µg糖蛋白。用去離子水將最終體積調整為35 µl。
2.加入10 µl 5x反應緩沖液7.5和2.5 µl變性溶液。在100°C加熱5分鐘。
3.酷。加入2.5 µl Triton X-100并混合。
4.向反應中添加2.0 µl酶。在37°C下孵育3小時。
特異性裂解所有天冬酰胺連接的復合，雜合或高甘露糖寡糖，除非巖藻糖基化了α（1-3）核心；否則將其切掉。天冬酰胺必須在兩個末端均肽鍵結合，無Endo F
比活性定義為在37°C，pH 7.5下1分鐘內催化從1微摩爾變性RNase B中釋放N-連接寡糖所需的酶量。通過SDS-PAGE監(jiān)測切割（切割的RNase B遷移更快）。
儲存將酶儲存在4°C。
當前位置：
