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當(dāng)前位置:首頁(yè)資料下載Acti-stain 488 phalloidin 說(shuō)明書(shū)

Acti-stain 488 phalloidin 說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2018/8/17點(diǎn)擊次數(shù):709

Cytoskeleton,Inc。很高興為藥物篩選,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專(zhuān)注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒,以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過(guò)程。我們的試劑盒可用于少量樣品,用于基礎(chǔ)研究或小屏幕(Biochem Kits™),也可用于大屏幕的高通量樣品(CytoDYNAMIX Screens™)。

除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品,我們還在產(chǎn)品線(xiàn)中為微管,微管蛋白,運(yùn)動(dòng)蛋白,小G蛋白效應(yīng)物,GAP,GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù)。

Acti-stain 488 phalloidin  

Acti-stain 488鬼筆環(huán)肽

 

(Cat. # PHDG1-A)   300 Slides

產(chǎn)品用途包括

· 固定組織切片和組織培養(yǎng)細(xì)胞制劑中肌動(dòng)蛋白絲的熒光染色。  注意:與許多肌動(dòng)蛋白抗體不同,Acti-stain™488鬼筆環(huán)肽僅與F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合,導(dǎo)致低背景熒光。此外,通過(guò)Acti染色結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白在物種之間沒(méi)有明顯差異。

· 體外穩(wěn)定熒光肌動(dòng)蛋白絲的制備。

 

肌動(dòng)蛋白染色在確定活細(xì)胞和固定細(xì)胞中細(xì)胞骨架的結(jié)構(gòu)和功能方面非常有用。肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架在活細(xì)胞中是非常動(dòng)態(tài)和不穩(wěn)定的結(jié)構(gòu),但是在探測(cè)或染色肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)之前可以用多聚甲醛固定。 

 

材料

鬼筆環(huán)肽是來(lái)自蘑菇傘形毒蕈的七氨基酸肽毒素,其特異性地并且以高親和力(Kd 20nM)結(jié)合至肌動(dòng)蛋白的聚合形式(F-肌動(dòng)蛋白)。鬼筆環(huán)肽將肌動(dòng)蛋白聚合的臨界濃度降低至小于1μg/ ml,從而充當(dāng)聚合增強(qiáng)劑。鬼筆環(huán)肽已經(jīng)用專(zhuān)有的綠色熒光染料標(biāo)記,使其可用于染色組織培養(yǎng)細(xì)胞和組織切片中的肌動(dòng)蛋白絲(1,參見(jiàn)圖1)和無(wú)細(xì)胞制劑。Acti-stain™488鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白絲保留了未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白的許多功能特征,包括它們與肌球蛋白相互作用的能力。Actin-stain TM 488鬼筆環(huán)肽以橙色固體形式提供。 

注意:鬼筆環(huán)肽是有毒的,必須小心處理(LD50人= 2mg / Kg)。

 

 

示例結(jié)果和規(guī)格

 

 

圖1.在瑞士3T3細(xì)胞中用Acti-stain TM 488染色的肌動(dòng)蛋白應(yīng)力纖維。

 

圖2. Acti-stain™鬼筆環(huán)肽的發(fā)射和激發(fā)掃描

 

 

 

 

 

 

 

用抗 - 紐蛋白(紅色),Dapi(藍(lán)色細(xì)胞核)和F-肌動(dòng)蛋白染色的Swiss 3T3細(xì)胞用Acti-stain TM 488(綠色F-肌動(dòng)蛋白,Cat。#PHDG1)染色。

 

Acti-stain TM 488的吸光度和熒光掃描。將標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽稀釋到甲醇中,并分別在350-750和500-750nm之間掃描其吸光度和激發(fā)光譜。吸光度峰值在500nm處,熒光在550nm處。

 

Acti-stain鬼筆環(huán)肽是可用的明顯的鬼筆環(huán)肽。表1描述了它們對(duì)F-肌動(dòng)蛋白的亮度,光穩(wěn)定性,背景和親和力常數(shù)。將這些性能特征與其他熒光鬼筆環(huán)肽進(jìn)行比較,您將看到使用Acti-stain™來(lái)滿(mǎn)足肌動(dòng)蛋白染色要求的優(yōu)勢(shì)。

表1.熒光鬼筆環(huán)肽的生物化學(xué)特征

共軛

貨號(hào)

波長(zhǎng)(Ex / Em)

亮度(AFU *)

光漂白的穩(wěn)定性(以秒為單位的半衰期**)

背景 (總AFU在100nM時(shí)的百分比**)

親和力(Kd,納摩爾)

熒光毒傘素

na

485/535 FITC濾波器組

432

6

22

72 +/- 12

Acti-stain™488

PHDG1

485/535 FITC濾波器組

832

57

五

55 +/- 8

Acti-stain™535

PHDR1

535/585 TRITC濾波器組

430

27

12

36 +/- 7

Acti-stain™555

PHDH1

535/585 TRITC濾波器組

551

46

16

63 +/- 8

Acti-stain™670

PHDN1

640/680 Cy5濾光片組

332

8

18

50 +/- 12

* = AFU通過(guò)定量細(xì)胞成像測(cè)量。** =在沒(méi)有抗褪色的情況下在染色的Swiss 3T3細(xì)胞中測(cè)量。

 

引用:

oitbak等,2011。微小RNA在神經(jīng)干細(xì)胞支持內(nèi)皮形態(tài)發(fā)生中的作用。血管細(xì)胞。v 3,p 25。

 

Yuan et al。,2012。使用同量異位標(biāo)簽對(duì)胺代謝物進(jìn)行亞秒級(jí)絕dui定量,以發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的通路活化。肛門(mén)?;瘜W(xué)。第84頁(yè),第2892-2899頁(yè)。

 

問(wèn)題1:我可以使用熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色活細(xì)胞中的F-肌動(dòng)蛋白嗎?

答案1:  不幸的是,不,鬼筆環(huán)肽不能用于在活細(xì)胞中染色F-肌動(dòng)蛋白。鬼筆環(huán)肽用于在固定細(xì)胞中染色F-肌動(dòng)蛋白。熒光鬼筆環(huán)肽僅與F-肌動(dòng)蛋白的天然四級(jí)結(jié)構(gòu)結(jié)合,提供低背景。鬼筆環(huán)肽結(jié)合的正確固定條件是在PBS中的3.7%(v / v)多聚甲醛10分鐘,因?yàn)樗A袅斯砉P環(huán)肽的高親和力結(jié)合所必需的季銨蛋白結(jié)構(gòu)。甲醇固定破壞天然構(gòu)象,因此不適合用鬼筆環(huán)肽染色F-肌動(dòng)蛋白。為了監(jiān)測(cè)活細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué),建議微量注射羅丹明標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白(Cat。#APHR或AR05)。有關(guān)更多信息,請(qǐng)參閱這些數(shù)據(jù)表。

 

問(wèn)題2:哪種熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽穩(wěn)定/亮?

答案2:  Acti-stains中亮和穩(wěn)定的是Acti-stain 488(綠色熒光; Cat。#PHDG1)。有關(guān)我們所有Acti-stains的更多信息,請(qǐng)參閱下表。 

共軛

貓。#

波長(zhǎng)(Ex / EM)

亮度(AFU)

光漂白的穩(wěn)定性*(1/2秒壽命)

背景(總AFU在100 nM時(shí)的百分比)

Acti-stain™488

PHDG1

535分之485

832

57

五

Acti-stain™535

PHDR1

585分之535

430

27

12

Acti-stain™555

PHDH1

585分之535

551

46

16

Acti-stain™670

PHDN1

六百八十零分之六百四十

332

8

18

* =在沒(méi)有抗褪色的情況下測(cè)量。

 

 

貨號(hào)

品名

規(guī)格

品牌

BK165-S

Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK165

Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK163-S

Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK163

Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK160-S

Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK160

Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK162-S

Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK162

Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK161-S

Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK161

Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

AAC04-Beads

Acetyl-Lysine Affinity Beads

ea

cytoskeleton

APY03-Beads

Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

ea

cytoskeleton

ASM11-Beads

SUMOylation 1 Affinity Beads

ea

cytoskeleton

ASM24-Beads

SUMOylation 2/3 Affinity Beads

ea

cytoskeleton

UBA01-Beads

Ubiquitination Affinity Beads

ea

cytoskeleton

CIG02-Beads

Acetyl-Lysine Control Beads

ea

cytoskeleton

CIG03-Beads

SUMO1 IP Control Beads

ea

cytoskeleton

CIG01-Beads

IgG Control Beads

ea

cytoskeleton

CUB02-Beads

Ubiquitination Control Beads

ea

cytoskeleton

BLR01

BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit

ea

cytoskeleton

BLR02

BlastR™ Rapid Filtration Kit

ea

cytoskeleton

AAC02

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)

ea

cytoskeleton

AAC03

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

ea

cytoskeleton

AAC03-HRP

Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

ea

cytoskeleton

AAC01

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)

ea

cytoskeleton

APY03

Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

ea

cytoskeleton

APY03-HRP

Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

ea

cytoskeleton

ASM01

SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)

ea

cytoskeleton

ASM24

SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)

ea

cytoskeleton

ASM23

SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

ea

cytoskeleton

ASM23-HRP

SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

ea

cytoskeleton

AUB01

Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal

ea

cytoskeleton

AUB01-HRP

Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal

ea

cytoskeleton

PHDG1

Acti-stain 488 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDH1

Acti-stain 555 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDN1

Acti-stain 670 phalloidin

ea

cytoskeleton

BK001

Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

BK003

Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

AKL95

Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AD99

Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

AS99

Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

ea

cytoskeleton

AKL99

Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AKF99

Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AP05

Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

APHR

Actin protein (rhodamine): human platelet

ea

cytoskeleton

AR05

Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AT01

Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

RP01P

Arp2/3 protein complex: porcine brain

ea

cytoskeleton

CS-TFC01

Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)

ea

cytoskeleton

CF01

Cofilin 1 protein: human recombinant

ea

cytoskeleton

HPG6

Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant

ea

cytoskeleton

MH01

Heavy meromyosin protein

ea

cytoskeleton

CS-MH03

Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)

ea

cytoskeleton

CS-MYS03

Myosin - cardiac S1 fragment

ea

cytoskeleton

CS-MYS04

Myosin - skeletal muscle S1 fragment

ea

cytoskeleton

CS-MYS05

Myosin - smooth muscle S1 fragment

ea

cytoskeleton

MY02

Myosin II protein: rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

MY03

Myosin protein: bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

PR02

Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant

ea

cytoskeleton

PHDR1

Rhodamine Phalloidin

ea

cytoskeleton

CY-SC001

SiR-Actin Kit

ea

cytoskeleton

CY-SC013

SiR700-Actin Kit

ea

cytoskeleton

VCG03

WASP protein VCA domain: GST tagged: human

ea

cytoskeleton

 

 

 

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