xpressbio XPEH0852說(shuō)明書(shū)

Human OAS1 (2'-5'-oligoadenylate synthase 1) ELISA Kit

人OAS1（2'-5'-寡腺苷酸合成酶1）ELISA試劑盒

目錄號(hào)：XPEH0852
尺寸：48t/ 96t
反應(yīng)性：人
范圍：1.56-100ng/ml
靈敏度：<0.938ng/ml
應(yīng)用：用于血清、血漿、組織勻漿等中OAS1的定量檢測(cè)
生物流體。
儲(chǔ)存：4°C，6個(gè)月
注：僅供研究使用。
xpressbio XPEH0852成套元件

化驗(yàn)原理
本試劑盒基于三明治酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)。將抗OAS1抗體預(yù)涂于96孔板上。生物素結(jié)合抗OAS1抗體
用作檢測(cè)抗體。標(biāo)準(zhǔn)品、試樣及生物素共軛檢測(cè)添加和未結(jié)合的結(jié)合物用洗滌緩沖液洗滌掉。TMB基板
用于觀察HRP酶促反應(yīng)。TMB被HRP催化產(chǎn)生藍(lán)色。
添加酸性停止溶液后變?yōu)辄S色的產(chǎn)品。黃色的密度是
與盤(pán)中采集的OAS1樣本量成比例。讀取O.D.吸光度
在微板閱讀器中450納米，然后可以計(jì)算出OAS1的濃度。
使用注意事項(xiàng)
1。檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作的有效性和樣品稀釋的適宜性
比例、中試使用標(biāo)準(zhǔn)和少量樣品
推薦。
2。打開(kāi)后和使用前，保持板干燥。
三。在使用該套件之前，旋轉(zhuǎn)管并將所有部件降到管底部。
4。儲(chǔ)存TMB試劑時(shí)要避光。
5。洗滌過(guò)程非常重要，不充分洗滌容易造成假陽(yáng)性。
6。建議對(duì)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試和樣品測(cè)試進(jìn)行重復(fù)試井。
7。不要讓微量板在分析時(shí)干燥，因?yàn)楦砂鍟?huì)使活性成分失活。
板。
8。不要重復(fù)使用和管子以避免交叉污染。
9。避免同時(shí)使用不同批次的試劑。
所需但未提供的材料
1。微板閱讀器（波長(zhǎng)：450納米）
2。37°C培養(yǎng)箱
三。自動(dòng)洗板機(jī)
4。精密單通道和多通道移液管及一次性針頭
5。清潔管和eppendorf管
6。去離子水或蒸餾水
手洗
在不接觸側(cè)壁的情況下丟棄板中的溶液。把盤(pán)子拍打在吸收劑上
濾紙或其他吸收性材料。用350ul洗滌緩沖液*填充每口井，并
浸泡1至2分鐘，然后從盤(pán)子中吸取內(nèi)容物，然后將盤(pán)子拍打在吸收劑上。
濾紙或其他吸收性材料。再重復(fù)此步驟兩次，總共
三洗。

自動(dòng)清洗
抽干所有井，然后用350ul洗滌緩沖液清洗三次。后一次清洗后，
將板倒置，并將板拍打在吸收性濾紙或其他吸收性材料上。它是
建議將墊圈設(shè)置為浸泡1分鐘。
樣品收集和儲(chǔ)存
收集后立即隔離試樣，然后立即分析（2小時(shí)內(nèi)）?；?br />等分并長(zhǎng)期保存在-20°C。避免多次凍融循環(huán)。
血清：允許樣品在室溫下凝塊2小時(shí)或在4℃前過(guò)夜。
以大約1000×g的速度離心20分鐘。收集上清液并攜帶
馬上化驗(yàn)出來(lái)。采血管應(yīng)是一次性的、非致熱的，并且
非內(nèi)毒素。
血漿：用EDTA-NA2作為抗凝劑收集血漿。離心樣品15個(gè)
在收集后30分鐘內(nèi)，在2-8°C下在1000×g條件下保持分鐘。收集上清液
立即進(jìn)行化驗(yàn)。避免溶血，高膽固醇樣品。
組織勻漿：一般情況下，溶血性血液可能會(huì)影響結(jié)果，因此
應(yīng)該用冰冷的PBS（0.01m，ph=7.4）沖洗組織，以清除多余的血液。
*地。紙巾應(yīng)稱(chēng)重，然后切碎成小塊。
在PBS中均勻化（體積取決于組織的重量。9毫升PBS
適用于1克組織塊。建議加入一些蛋白酶抑制劑
在冰上放一個(gè)玻璃均質(zhì)器。為了進(jìn)一步破壞細(xì)胞，你可以用超聲波
懸浮液用超聲波細(xì)胞破壞或使其經(jīng)受凍融循環(huán)。這個(gè)
然后勻漿以5000×g的速度離心5分鐘，得到上清液。
細(xì)胞培養(yǎng)上清液：離心上清液20分鐘，去除不溶性雜質(zhì)
在2-8°C的溫度下，在1000×g的溫度下收集細(xì)胞碎片。收集干凈的上清液并進(jìn)行分析。
立即。
其他生物液體：在2-8°C下以1000×g的速度離心樣品20分鐘。收集
上清液，立即進(jìn)行化驗(yàn)。
樣品制備：樣品應(yīng)清晰透明，離心去除。
懸浮固體。
注：5天內(nèi)使用的樣品可在4°C下儲(chǔ)存，否則必須儲(chǔ)存樣品。
在-20°C（≤1個(gè)月）或-80°C（≤2個(gè)月）下，以避免生物活性和污染的損失。
溶血樣品不適用于本試驗(yàn)。
樣品稀釋指南
終用戶(hù)應(yīng)首先估計(jì)試驗(yàn)樣品中目標(biāo)蛋白的濃度，以及
選擇適當(dāng)?shù)南♂屢蜃?，使稀釋后的目?biāo)蛋白濃度降到宜。
套件的檢測(cè)范圍。用提供的稀釋緩沖液稀釋樣品，并進(jìn)行幾次試驗(yàn)
在實(shí)踐中可能是必要的。試樣必須與稀釋緩沖液充分混合。和
在實(shí)驗(yàn)前，還應(yīng)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和樣品。

高目標(biāo)蛋白濃度（1000-10000ng/ml）：稀釋度：1:100。（即加入1μl
樣品放入99μl樣品/標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液中。）
培養(yǎng)基靶蛋白濃度（100-1000ng/ml）：稀釋?zhuān)?:10（即加入10μl
樣品放入90μl樣品/標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液中。）
低靶蛋白濃度（1.56-100ng/ml）：稀釋?zhuān)?:2（即加入50μl樣品）
放入50μl樣品/標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液中。）
目標(biāo)蛋白濃度極低（≤1.56ng/ml）：不需要稀釋?zhuān)?:2稀釋。
試劑制備與貯存
使用前將所有試劑置于室溫。
1，Wash Buffer：
用去離子或蒸餾法將30毫升濃縮洗滌液稀釋至750毫升洗滌液中。
水。將未使用的溶液放回4°C。如果濃縮液中形成晶體，可以加熱。
與40°C水?。訜釡囟炔粦?yīng)超過(guò)50°C）混合，輕輕攪拌至
晶體*溶解了。溶液應(yīng)冷卻至室溫，然后
使用。
2、標(biāo)準(zhǔn)：
1）。100ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液：將1 ml樣品/標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液加入其中
標(biāo)準(zhǔn)管，保持室溫10分鐘，并充分混合。
2）。50ng/ml→1.56ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液：用50ng/ml、25ng/ml標(biāo)記6個(gè)eppendorf管，
分別為12.5ng/ml、6.25ng/ml、3.125ng/ml、1.56ng/ml。分份0.3毫升樣品/
標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液進(jìn)入每個(gè)試管。將0.3ml上述100ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液加入
第1管并*混合。將0.3毫升從管轉(zhuǎn)移到第二管，并*混合。
將0.3ml從第二管轉(zhuǎn)移到第三管，并*混合，依此類(lèi)推。
注：標(biāo)準(zhǔn)溶液宜在2小時(shí)內(nèi)使用。標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)為
4°C，多12小時(shí)。或在-20°C下儲(chǔ)存48小時(shí)。避免反復(fù)的凍融循環(huán)。
3、生物素檢測(cè)抗體工作液的制備
實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
1）計(jì)算工作液總體積：0.1 ml/井×井?dāng)?shù)。（允許）
比總體積多0.1-0.2毫升）
2）用抗體稀釋液1:100稀釋生物素檢測(cè)抗體，混合
*地。（即在99μl抗體稀釋液中加入1μl生物素檢測(cè)抗體。）

4、法制備辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素的共軛（SABC）工作的解決方案：
準(zhǔn)備在30min，之前的實(shí)驗(yàn)。
1）calculate總卷在工作的解決方案：0.1毫升/（×）井的數(shù)量。（allow
0.1～0.2毫升以上的總卷）
2）的稀釋SABC用SABC稀釋緩沖AT 1∶100和thoroughly混音。（即增加1μL，SABC法檢測(cè)
激情99μL，SABC法檢測(cè)稀釋緩沖）。
檢測(cè)程序
在增的井，equilibrate SABC法對(duì)工作液和底物TMB方法至少30
在小的房間的溫度（37°C）。當(dāng)diluting樣品和reagents，他們必須是混合
*和evenly。。。。。。。這是推薦的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖A for each試驗(yàn)。
1。的標(biāo)準(zhǔn)集，測(cè)試樣本和控制（零）井的預(yù)涂板分別為，和
然后，記錄他們的位置。這是推薦的測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)和樣品中的每
重復(fù)的。洗板2時(shí)代前的綜合標(biāo)準(zhǔn)，抽樣和控制（零）井！?。。。。?！
2。aliquot 0.1ml（100ng／ml，50ng／ml，25ng /毫升，12.5ng /毫升，6.25ng /毫升，3.125ng /毫升，1.56ng /毫升，
標(biāo)準(zhǔn)溶液的入井的標(biāo)準(zhǔn)。
3。添加0.1毫升/標(biāo)準(zhǔn)樣品的稀釋緩沖的激情控制（零）的話(huà)。
4。添加0.1毫升恰當(dāng)稀疏抽樣（人體血清、血漿、組織勻漿和其他
生物流體的熱情。）抽樣試驗(yàn)井。
5。。。。。。。該密封板與A和incubate覆蓋在37°C為90分鐘。
6。remove的封面上，必須在內(nèi)容和板，洗板和2與華盛頓時(shí)報(bào)的緩沖。
不要讓井干式化外，在任何時(shí)間。
7。添加0.1毫升的生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體工作液入井（以上的標(biāo)準(zhǔn)，
試驗(yàn)樣品與零井）。添加的溶液，在底部每井無(wú)接觸加熱的
側(cè)壁。
8。該密封板與A和incubate覆蓋在37°C（60分鐘。
9。remove的封面，和洗板3時(shí)代與洗的緩沖。
10。添加0.1毫升，SABC法檢測(cè)溶液工作熱情，每孔，在蓋板和incubate在37°C的方法
30分鐘。
11。remove的覆蓋和洗板5與華盛頓時(shí)報(bào)的緩沖，和每一次讓洗
緩沖停留在井的方法1～2分鐘。
12。添加90μL（TMB底物的熱情，每孔，在蓋板和incubate 37°C，在黑暗的.
在15到30分鐘。（注：這incubation時(shí)參考使用的方法是只讀的，優(yōu)化的時(shí)
應(yīng)該由用戶(hù)端的決心。）和shades藍(lán)可以在個(gè)3～4口井
（與集中的標(biāo)準(zhǔn)溶液中OAS1），其他井秀好obvious色彩。
13。。。。。。。添加50μL大學(xué)停止溶液的熱情和thoroughly每好的混合。激情黃色顏色的變化
立即。
14。讀《absorbance外徑在450 nm的微孔板讀者立即后的增
停止的溶液。

注：如果測(cè)量的樣品被稀釋?zhuān)瑢⑾♂屜禂?shù)乘以濃度。
從插值得到稀釋前的濃度。
總結(jié)
1。在添加標(biāo)準(zhǔn)、樣品和控制（零）井之前，清洗2次平板！
2。在37°C下向每個(gè)孔中添加100μl標(biāo)準(zhǔn)或樣品90分鐘。
三。在37°C下每孔加入100μL生物素檢測(cè)抗體工作液60分鐘。
4。吸洗3次
5。每口井加入100μL SABC工作液。在37°C下培養(yǎng)30分鐘
6。吸洗5次
7。添加90μl TMB基板。在37°C下培養(yǎng)15-30分鐘
8。加入50μl停止溶液。立即在450牛米處讀取
9。計(jì)算結(jié)果
典型數(shù)據(jù)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
OAS1酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒的典型標(biāo)準(zhǔn)運(yùn)行結(jié)果如下所示。這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)是
在實(shí)驗(yàn)室生成，僅供演示。每個(gè)用戶(hù)都應(yīng)該獲得自己的標(biāo)準(zhǔn)
按實(shí)驗(yàn)曲線(xiàn)。（不適用）

特異性
該方法靈敏度高，對(duì)OAS1的檢測(cè)有很好的特異性。未觀察到OAS1與類(lèi)似物之間存在明顯的交叉反應(yīng)或干擾。
注：受現(xiàn)有技能和知識(shí)的限制，我們無(wú)法完成OAS1與所有類(lèi)似物之間的交叉反應(yīng)檢測(cè)，因此交叉反應(yīng)可能仍然存在。
恢復(fù)
下面列出的基質(zhì)中加入一定水平的OAS1，回收率為
通過(guò)將測(cè)量值與樣品中預(yù)期的OAS1量進(jìn)行比較計(jì)算。

線(xiàn)性度
通過(guò)加入適當(dāng)濃度的
OA1及其系列稀釋劑。通過(guò)計(jì)算的百分比來(lái)證明結(jié)果。
集中到預(yù)期

精密度
分析內(nèi)精密度（分析內(nèi)精密度）：低、中、高3個(gè)樣品
分別在一個(gè)平板上測(cè)試OAS1 20次。
分析間精密度（分析間精密度）：低、中、高3個(gè)樣品
在3個(gè)不同的平板上測(cè)試OAS1，每個(gè)平板上重復(fù)8次。
cv（%）=sd/平均x100
內(nèi)分析：cv<8%
化驗(yàn)間：CV<10%
穩(wěn)定性
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒的穩(wěn)定性取決于活性損失率。這個(gè)工具的損耗率比較低
在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件下，在有效期內(nèi)不得超過(guò)10%。

為了盡量減少對(duì)性能、操作程序和實(shí)驗(yàn)室條件的額外影響，
尤其要嚴(yán)格控制室溫、空氣濕度、培養(yǎng)箱溫度。
也強(qiáng)烈建議由同一個(gè)操作員從
從開(kāi)始到結(jié)束。