spherotech SPHERO簡(jiǎn)介

羥基顆粒用于促進(jìn)免疫分析的發(fā)展，以及蛋白質(zhì)、細(xì)胞或各種目標(biāo)分析物的定量、分離、純化和表征。為了提供羥基的好處，Spherotech提供SPHEROTM羥yi基（HEMA）/聚苯乙烯共聚物磁粉。這些共聚物顆粒提供親水表面，減少固定化蛋白質(zhì)的變性。此外，羥yi基基團(tuán)與水溶液中的一層水形成氫鍵，防止顆粒聚集。這兩個(gè)特征轉(zhuǎn)化為更長(zhǎng)的配體穩(wěn)定性，更低的非特異性

結(jié)合電位，與表面疏水性更強(qiáng)的顆粒相比，具有更穩(wěn)定的顆粒溶液。盡管羥基不會(huì)自發(fā)地與生物分子上的官能團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，但它們可以通過(guò)許多已知的反應(yīng)機(jī)制被激活進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)。該反應(yīng)導(dǎo)致配體的共價(jià)連接，并且可以在水或非水條件下進(jìn)行。通過(guò)利用非水條件，可防止活化劑和中間基團(tuán)的水解。為了促進(jìn)與羥yi基表面的共軛，可以使用交聯(lián)劑在粒子和共價(jià)偶聯(lián)的配體之間形成間隔臂。各種交聯(lián)劑已成為*的工具

用于制備用于許多免疫分析、蛋白質(zhì)分離和鑒定協(xié)議的包衣珠。常見(jiàn)和有效的交聯(lián)劑是異雙功能交聯(lián)劑，它具有兩個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)。雜雙功能交聯(lián)劑在分子共軛過(guò)程中提供更好的控制和定向，以減少二聚體和聚合物的生成。仔細(xì)選擇配體、固定化化學(xué)和配體密度將有助于產(chǎn)生適合特定應(yīng)用所需生物活性的選擇性和靈敏度。

PMPI或?qū)︸R來(lái)酰亞胺苯基異氰酸酯是一端帶有異氰酸酯基團(tuán)，另一端帶有馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)的異雙功能交聯(lián)劑。因此，它用于促進(jìn)硫化配體與配體的共軛

羥yi基珠表面。傳統(tǒng)上，PMPI用于將硫化蛋白質(zhì)或肽與碳水化合物、類(lèi)固醇或維生素1交聯(lián)。PMPI對(duì)水分非常敏感，需要在非水系統(tǒng)中溶解。信息技術(shù)

不能與緩沖液一起使用，但可溶于甲苯和己烷，也可與二氯甲烷反應(yīng)。

在此，我們提出了一種方法，適用于使用PMPI將巰基化配體交聯(lián)到球形羥yi基（HEMA）/聚苯乙烯共聚物磁粉上。

其他方便的活化方法使用化合物在羥基顆粒上形成活性羰基

如羧基二咪唑（CDI）或碳酸二丁二酰亞胺（DSC）。這些活化劑生成咪唑氨基甲酸酯（CDI）或NHS碳酸鹽（使用DSC），然后它們會(huì)自發(fā)地與胺反應(yīng)。在里面

在CDI的情況下，咪唑氨基甲酸酯也會(huì)自發(fā)地與巰基發(fā)生反應(yīng)。由于這些活化試劑的任何部分都不會(huì)成為共軛分子和羥基珠之間最終鍵的一部分，

它們被認(rèn)為是零長(zhǎng)度交聯(lián)劑（2,3）。本文描述了使用CDI和DSC的詳細(xì)耦合協(xié)議。然而，Spherotech建議優(yōu)化質(zhì)量試劑和偶聯(lián)條件，因?yàn)閮烧叨紩?huì)影響配體與功能化珠表面偶聯(lián)的質(zhì)量

材料：

1.HEMA-300-10（HEMA/聚苯乙烯共聚物磁粉，1%w/v，25-37μm，10 mL）

2.對(duì)馬來(lái)酰亞胺苯基異氰酸酯（PMPI）

3.磷酸鹽緩沖鹽水，0.1M，pH值7.4（PBS）

4.二甲基亞砜（DMSO）

5.乙腈

6.具有巰基（–SH）反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)的化合物