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內(nèi)皮細胞組織消化手冊

更新時間:2016-02-16點擊次數(shù):1257

世界*實驗材料供應商 Worthington Biochemical 正式授權(quán)上海起發(fā)為其中國代理, Worthington Biochemical 在一直是行業(yè)的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產(chǎn)品和服務,上海起發(fā)一直秉承為中國科研客戶帶來的產(chǎn)品,的服務,簽約 Worthington Biochemical 就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產(chǎn)品和服務,您的滿意將是我們zui大的收獲

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Worthington組織消化指南

引言

組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細胞生物學研究的原代細胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應用多年,但是對其組織消化和細胞收集的作用機制卻沒有全面的理解。  由此導致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機選擇或基于過去的經(jīng)驗,而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案,以及如何根據(jù)具體實驗目的修正消化方案以獲得更好的實驗結(jié)果。

細胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個細胞,而影響結(jié)果的原因有很多,包括(不限于)以下:

1、組織類型

2、物種來源

3、動物年齡

4、遺傳改造情況(如knockouts)

5、所用的消化培養(yǎng)液

6、所用的酶

7、消化酶中的雜質(zhì)

8、所用消化酶的工作濃度

9、溫度

10、孵育時間

通常前四個原因沒辦法選擇,而剩下的原因一般由經(jīng)驗決定以獲取zui適實驗結(jié)果。

通過查閱文獻來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實驗數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質(zhì)的復雜而動態(tài)的特性,以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外,組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成,這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育(年齡)之間存在明顯的差異,這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶,如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。

本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細胞收集知識和方法,描述了標準的實驗步驟, 以便于制定一個*的細胞分離方案,同時列舉了一些相關(guān)的參考文獻。

下表列出多種組織的適宜消化酶(含參考文獻,以組織類型和物種分類,詳見鏈接)

脂肪組織

腎上腺組織

骨組織

腦組織

軟骨組織

結(jié)腸組織

內(nèi)皮組織

上皮組織

眼

心臟

腸

腎

肝

肺

淋巴結(jié)

乳腺

其它組織

其他組織

肌組織

神經(jīng)組織

胰腺

腮腺

垂體

前列腺

生殖

動物鱗片

皮膚

脾臟

干細胞

胸腺

甲狀腺/甲狀旁腺

扁桃體

腫瘤

 

 

 

注:使用Worthington公司消化酶的文獻不限于上表鏈接中所列,一般而言,Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。

 

內(nèi)皮細胞組織消化手冊

 

物種詳細來源細胞名稱消化用酶培養(yǎng)基參考文獻
牛牛Bovine umbilical cord (BUVEC)Collagenase: 0.1%Dulbecco's/Ham F-12Ricken Albert M, Traenkner Anja, Merkwitz Claudia, Hummitzsch Katja, Grosche Jens, Spanel-Borowski Katharina: The short prolactin receptor predominates in endothelial cells of micro- and macrovascular origin, J Vasc Res 44, 19-30, 2007
牛牛Pulmonary artery endothelial and smooth muscle cellsCollagenase: 0.04-0.05%RPMI-1640Yu, M., McAndrew, R., Al-Saghir, R., Maier, K., Medhora, M., Roman, R. and Jacobs, E.: Nitric Oxide Contributes to 20-HETE-Induced Relaxation of Pulmonary Arteries., J Appl Physiol 93, 1391, 2002
Soybean Trypsin Inhibitor: 0.04%
牛牛, (歐洲牛), 牛犢EndothelialCollagenase: 1000 u/mlPBS, CMFDel Vecchio, P.J., Siflinger-Birnboim, A., Belloni, P.N., Holleron, L.A., Lum, H., and Malik, A.B.: Culture and Characterization of Pulmonary Microvascular Endothelial Cell, In Vitro Cell Dev Biol 28A, 711, 1992
Pulmonary
牛牛犢EndothelialTrypsin: 0.25%HEPESVender, R.: Role of Endothelial Cells in the Proliferative Response of Cultured Pulmonary Vascular Smooth Muscle Cells to Reduced Oxygen Tension, In Vitro Cell Dev Biol 28A, 403, 1992
牛牛, 成年的Cerebral arteryCollagenase: 0.2%HBSSMachi, T., Kassell, N.F., and Scheld, W.M.: Isolation and Characterization of Endothelial Cells From Bovine Cerebral Arteries, In Vitro Cell Dev Biol 26, 291, 1990
Endothelial
牛牛EndothelialTrypsin: 0.05%Krebs Ringer solutionDeNucci, G., Gryglewski, R.J., Warner, T.D., and Vane, J.R.: Receptor-Mediated Release of Endothelium-Derived Relaxing Factor and Prostacyclin From Bovine Aortic Endothelial Cells Is Coupled, Proc Natl Acad Sci U S A 85, 2334, 1988
Aortic
牛牛Endothelial, pulmonary arteryCollagenase: 0.1%CMF-Dulbecco's PBSMartin, T.: Formation of Diacylglycerol by a Phospholipase D-phosphatidate Phosphatase Pathway Specific for Phosphatidylcholine in Endothelial Cells, Biochim Biophys Acta 962, 282, 1988
牛牛EndothelialCollagenase Type 2: 0.1%PBSCarson, M.P. and Haudenschild, C.C.: Microvascular Endothelium and Pericytes: High Yield, Low Passage Cultures, In Vitro Cell Dev Biol 22, 344, 1986
Aorta
牛牛EndothelialCollagenase Type 2: 0.1%DMEMKinsella, Michael G. and Wight, Thomas N.: Modulation of Sulfated Proteoglycan Synthesis by Bovine Aortic Endothelial Cells During Migration, J Cell Biol 102, 679, 1986
Aortic
牛牛EndothelialCollagenase: 0.5%DMEM/Ham's F-12Gospodarowicz, D., Massoglia, S., Cheng, J., and Fujii, D.: Effect of Fibroblast Growth Factor and Lipoproteins on the Proliferation of Endothelial Cells Derived From Bovine Adrenal Cortex, Brain Cortex, and Corpus Luteum Capillaries, J Cell Physiol 127, 121, 1986
牛牛EndothelialCollagenase Type 2: 0.2%Dulbecco's PBSGoetz, I.., Warren, J., Estrada, C., Roberts, E., and Krause, D.: Long-Term C*tion of Arterial and Capillary Endothelium From Adult Bovine Brain, In Vitro Cell Dev Biol 21, 172, 1985
Brain arteries
牛牛犢EndothelialCollagenase: 0.75%DMEMVoyta, J., Via, D., Butterfield, C., and Zetter, B.: Identification and Isolation of Endothelial Cells Based on Their Increased Uptake of Acetylated-Low Density Lipoprotein, J Cell Biol 99, 2034, 1984
Smooth muscle
牛牛EndothelialTrypsin: 0.2%PBS: DMEMScott, D., Murray, J., and Barnes, M.: Investigation of the Attachment of Bovine Corneal Endothelial Cells, Exp Cell Res 144, 472, 1983
Corneal
牛牛, 2-3 周EndothelialCollagenase Type 1: 0.2%RPMI 1640 w/1% Fetal Bovine SerumLee, S., Douglas, W., Deneke, S., and Fanburg, B.: Ultrastructural Changes in Bovine Pulmonary Artery Endothelial Cells Exposed to 80% O2 In Vitro, In Vitro 19, 714, 1983
Pulmonary artery
牛牛Endothelial, CornealTrypsin: 0.05%0.01M Phosphate buffer with 0.02% EDTARobinson, J. and Gospodarowicz, D.: Glycosaminoglycans Synthesized by Cultured Bovine Corneal Endothelial Cells, J Cell Physiol 117, 368, 1983
0.9% NaCl (See Reference)
牛牛EndothelialCollagenase Type 1: 0.10%PBSOlander, J., Marasa, J., Kimes, R., Johnston, G., and Feder, J.: An assay measuring the stimulation of several types of bovine endothelial cells by growth factor(s) derived from cultured human tumor cells, In Vitro 18, 99, 1982
Subclavian vein
牛牛AorticCollagenase Type 2: 0.10%PBSMakarski, J. S.: Stimulation of cyclic AMP production by vasoactive agents in cultured bovine aortic and pulmonary artery endothelial cells, In Vitro 17, 450, 1981
Pulmonary artery
牛牛犢, 胎兒, 4-9 個月EndothelialCollagenase Type 1: 0.25%PBSRosen, E., Mueller, S., Noveral, J., and Levine, E.: Proliferative Characteristics of Clonal Endothelial Cell Strains, J Cell Physiol 107, 123, 1981
牛牛, 成年的AortaCollagenase Type 1: 125 u/mlDulbecco's PBS with calcium and magnesiumCotta-Pereira, G., Sage, H., Bornstein, P., Ross, R., and Schwartz, S.: Studies of Morphologically Atypical ("Sprouting") Cultures of Bovine Aortic Endothelial Cells. Growth Characteristics and Connective Tissue Protein Synthesis, J Cell Physiol 102, 183, 1980
牛牛, 年幼的Pulmonary arteryCollagenase: 0.1%Medium 199Ryan, U., Mortara, M., and Whitaker, C.: Methods for Microcarrier Culture of Bovine Pulmonary Artery Endothelial Cells Avoiding the Use of Enzymes, Tissue Cell12, 619, 1980
牛牛ForeskinCollagenase: 0.5%Dulbecco's MEM w/10% calf serumFolkman, J., Haudenschild, C. C., and Zetter, B. R.: Long-term Culture of Capillary Endothlial Cells, Proc Natl Acad Sci U S A 76, 5217, 1979
牛牛Saphenous VeinCollagenase: 0.01%PBSEskin, S., Sybers, H., Trevino, L., Lie, J., and Chimoskey, J.: Comparison of Tissue-Cultured Bovine Endothelial Cells from Aorta and Saphenous Vein, In Vitro 14, 903, 1978
Aorta
牛牛EndothelialCollagenase Type 2: 0.1%PBSSchwartz, S.M.: Selection and Characterization of Bovine Aortic Endothelial Cells,In Vitro 14, 966, 1978
Thoracic aorta 
Saphenous veins
牛牛Pulmonary arteryCollagenase Type 2: 0.25%Puck's solutionRyan, U.S., Clements, E., Habliston, D., and Ryan, J.W.: Isolation And Culture of Pulmonary Artery Endothelial Cells, Tissue Cell 10, 535, 1978
牛牛犢EndothelialCollagenase Type 2: 0.1%DMEMHoward, B., Macarak, E., Gunson, D., and Kefalides, N.: Characterization of the Collagen Synthesized by Endothelial Cells in Culture, Proc Natl Acad Sci U S A 73 (7), 2361, 1976
犬狗MicrovesselsCollagenase Type 4: 0.1%DMEMGerhart, D. Z., Broderius, M. A., and Drewes, L. R.: Cutlured Human and Canine Endothelial Cells from Brain Microvessels, Brain Res Bull 21, 785, 1988
(包括人類)
犬狗, 雜種狗, 成年的EndotheliumTrypsin: 0.1%Earle's PBS, CMFFord, J., Burkel, W., and Kahn, R.: Isolation of Adult Canine Venous Endothelium for Tissue Culture, In Vitro 17, 44, 1981
Jugular vein
豚鼠豚鼠, 雌性, 300-350克Coronary endothelialCollagenase Type 2: 0.1%see referenceBuxton I L, Kaiser R A, Oxhorn B C, Cheek D J: Evidence supporting the Nucleotide Axis Hypothesis: ATP release and metabolism by coronary endothelium,Am J Physiol Heart Circ Physiol 281, H1657-66, 2001
人類人類Vascular endothelialCollagenase Type 1: 0.1%HBSSGanguly, A., Zhang, H., Sharma, R., Parsons, S. and Pa, K.: Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells and Their Use in the Study of Neutrophil Transmigration Under Flow Conditions., J Vis Exp 66, e4032, 2012
人類人類, 18-68 yrCorneal endothelialCollagenase: 0.2%DMEM/F12Li Wei, Sabater Alfonso L, Chen Ying-Ting, Hayashida Yasutaka, Chen Szu-Yu, He Hua, Tseng Scheffer C G: A novel method of isolation, preservation, and expansion of human corneal endothelial cells, Inv Ophthal Visual Sci 48, 614-20, 2007
Neutral Protease: 1.0%
人類人類Endothelial and vascular smooth muscleCollagenase Type 1: 0.2%HBSSMoss, S., Bates, M., Parrino, P. and Woods, TC.: Isolation of Endothelial Cells and Vascular Smooth Muscle Cells from Internal Mammary Artery Tissue., Ochsner J 7, 133, 2007
人類人類HUVECCollagenase Type 1: 0.1%HBSSDavis, J., Crampton, S. and Hughes. C.: Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)., J Vis Exp 3, 183, 2007
人類人類HUVECCollagenase Type 4: 0.1%RPMI 1640Silva AP, Kaufmann JE, Vivancos C, Fakan S, Cavadas C, Shaw P, Brunner HR, Vischer U, and Grouzmann E.: Neuropeptide Y expression, localization and cellular transducing effects in HUVEC, Biol Cell 97(6), 457, 2005
人類人類EndothelialCollagenase Type 2: 0.1%DMEMPa, V., Logan, A., Watkinson, J., Uz-Zaman, S., Sheppard, M., Ramsden, J. and Eggo, M.: Isolation and Characterization of Human Thyroid Endothelial Cells.,Am J Physiol Endocrinol Metab 284, E168, 2003
人類人類Esophageal microvascular endothelialCollagenase Type 2: 0.2%MCDB-131Rafiee, P., Ogawa, H., Heidemann, J., Li, M., Aslam, M., Lamirand, T., Fisher, P., Graewin, S., Dwinell, M., Johnson, C., Shaker, R. and Binion, D.: Isolation and Characterization of Human Esophageal Microvascular Endothelial Cells: Mechanisms of Inflammatory Activation., Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol285, G1277, 2003
人類人類Colonic endothelial cellsCollagenase Type 2: 0.25%HBSS/5%FBSWang D., Lehman R., Donner D., Matli M., Warren R., and Welton M.: Expression and Endocytosis of VEGF and Its Receptors in Human Colonic Vascular Endothelial Cells, Am J Physiol/Gastro 282, G1088, 2002
人類人類Pulmonary vascular endothelial cellsNeutral Protease: 1.18 u/mlM199Muller AM, Hermanns MI, Skrzynski C, Nesslinger M, Muller KM, and Kirkpatrick CJ.: Expression of the endothelial markers PECAM-1, vWf, and CD34 in vivo and in vitro, Exp Mol Pathol 72, 221, 2002
Elastase: 10 u/ml
人類人類HUVECCollagenase Type 2: 0.1%PBSTakano Manabu, Meneshian Avedis, Sheikh Emran, Yamakawa Yasuhiko, Wilkins Kirsten Bass, Hopkins Elise A, Bulkley Gregory B: Rapid upregulation of endothelial P-selectin expression via reactive oxygen species generation, Am J Physiol Heart Circ Physiol 283, H2054-61, 2002
人類人類EndothelialTrypsin: 2%PBSGoolcharran, C., Cleland, J., Keck, R., Jones, A., and Borchardt, R.: Comparsion of the Rates of Deamidation, Diketopiperazine Formation and Oxidation in Recombinant Human Vascular Endothelial Growth Factor and Model Peptides,AAPS PharmSci 2 (1), 5, 2000
人類人類HUVEC, porcine pulmonary arterial endothelial cellsCollagenase Type 2: 0.2%DMEMKwak HJ, Lee SJ, Lee YH, Ryu CH, Koh KN, Choi HY, and Koh GY.: Angiopoietin-1 inhibits irradiation- and mannitol-induced apoptosis in endothelial cells, Circulation 101(19), 2317, 2000
人類人類Vascular endothelial cellsCollagenase: 0.1%DMEMSchonbeck U, Sukhova GK, Graber P, Coulter S, Libby P: Augmented expression of cyclooxygenase-2 in human atherosclerotic lesions, Am J Pathol 155, 1281-91, 1999
人類人類Hepatic endothelial cellsCollagenase: 0.2%DMEMSanyal AJ, and Mirshahi F.: A simplified method for the isolation and culture of endothelial cells from pseudointima of transjugular intrahepatic portasystemic shunts, Lab Invest 78(11), 1469, 1998
人類人類Foreskin microvascular endothelialTrypsin: 0.3%HBSSWojta J, Gallicchio M, Zoellner H, Filonzi E, Hamilton J, McGrath K: Interleukin-4 stimulates expression of urokinase-type-plasminogen activator in cultured human foreskin microvascular endothelial cells, Blood 81, 3285-92, 1993
人類人類EndothelialTrypsin: 0.3.%HBSSLee, K, Lawley, T, Xu, Y, and Swerlick, R.: VCAM-1-, ELAM-1-, and ICAM-1-Independent Adhesion of Melanoma Cells to Cultured Human Dermal Microvascular Endothelial Cells, J Invest Dermatol 98, 79, 1992
(see reference)
人類人類Vascular endothelialNeutral Protease: 0.15%M-199Farber HW, Antonov AS, Romanov YA, Smirnov VN, Scarfo LM, Beer DJ: Cytokine secretion by human aortic endothelial cells is related to degree of atherosclerosis,Am J Physiol 262, H1088-95, 1992
Trypsin: 0.25%
人類人類Umbilical veinCollagenase: 0.1%Cord BufferGrant, D.S., Lelkes, P.I., Fukuda, K., Kleinman, H.K.: Intracellular Mechanisms Involved in Basement Membrane Induced Blood Vessel Differentiation In Vitro, In Vitro Cell Dev Biol 27, 327, 1991
HUVEC(See Reference)
人類人類Crypt cellsCollagenase: 125 u/mlRMPI 1640Whitehead, R., and Eeden, P.: A Method For the Prolonged Culture of Colonic Epithelial Cells, J Tiss Cul Meth 13, 103, 1991
人類人類EndothelialCollagenase Type 1: 0.2%Medium 199Fischer, E., Stingl, A., and Kirkpatrick, C.: Migration Assay for Endothelial Cells in Multiwells Application to Studies on the Effect of Opioids, J Immunol Methods 128, 235, 1990
人類人類Human umbilical vein endothelial cellsCollagenase Type 2: 75 u/mlM199Muller WA, Ratti CM, McDonnell SL, Cohn ZA: A human endothelial cell-restricted, externally disposed plasmalemmal protein enriched in intercellular junctions, J Exp Med 170, 399-414, 1989
人類人類MicrovesselsCollagenase Type 4: 0.1%DMEMGerhart, D. Z., Broderius, M. A., and Drewes, L. R.: Cutlured Human and Canine Endothelial Cells from Brain Microvessels, Brain Res Bull 21, 785, 1988
人類人類Endothelial/HUVECTrypsin: 0.3%HBSS/PBS, Medium 199Kubota, Y., Kleinman, H., Martin, G., and Lawley, T.: Role of Laminin and Basement Membrane in Morphological Differentiation of Human Endothelial Cells into Capillary-like Structures, J Cell Biol 107, 1589, 1988
Foreskin & umbilical cord(see reference)
人類人類Umbilical cordCollagenase: 0.1%HEPESHoshi, H., Kan, M., Chen, J., and McKeehan, W.: Comparative Endocrinology-Paracrinology-Autocrinology of Human Adult Large Vessel Endothelial and Smooth Muscle Cells, In Vitro Cell Dev Biol 24 (4), 309, 1988
Smooth muscle
人類人類EndothelialCollagenase Type 2: 0.1%PBS, CMFSharefkin, J.B., Fairchild, K.D., Albus, R.A., Cruess, D.F., and Rich, N.M.: The Cytoxic Effect of Surgical Glove Powder Particles on Adult Human Vascular Endothelial Cell Cultures: Implications for Clinical Uses of Tissue Culture Techniques, J Surg Res 41, 463, 1986
Saphenous vein
人類人類EndothelialCollagenase: 0.1%HEPESHoshi, H., and McKeehan, W.: Isolation, Growth Requirements, Cloning, Prostacylclin Production and Life-Span of Human Adult Endothelial Cells in Low Serum Culture Medium, In Vitro Cell Dev Biol 22 (1), 51, 1986
人類人類EndothelialTrypsin: 0.3%PBSMarks, R.M., Czerniecki, M., and Penny, R.: Human Dermal Microvascular Endothelial Cells: An Improved Method for Tissue Culture and Description of Some Singular Properties in Culture, In Vitro Cell Dev Biol 21, 627, 1985
Dermal
人類人類FibroblastsHyaluronidase: 0.10%DMEMGordon, P., Sussman, I., and Hatcher, V.: Long-Term Culture of Human Endothelial Cells, In Vitro 19, 661, 1983
Foreskin
人類人類Iliac arteriesCollagenase: 0.25%PBS w/Ca++, Mg++, & BSAGlassberg, M., Bern, M., Coughlin, S., Haudenschild, C., Hoyer, L., and Antoniades, H.: Cultured Endothelial Cells Derived from the Human Iliac Arteries,In Vitro 18, 859, 1982
(see reference)
人類人類, 成年的Peripheral blood mononuclearCollagenase: 0.25%RPMI 1640Ashida, E., Johnson, A., and Lipsky, P.: Human endothelial cell-lymphocyte interaction. Endothelial cells function as accessory cells necessary for mitogen-induced human T lymphocyte activation in vitro, J Clin Invest 67, 1490, 1981
Monocytes
T cells
Endothelial
人類人類Microvascular endothelialNeutral Protease: at 1000 u/mlKonigsberg's modification of HBSSSherer, G., Fitzharris, T., Faulk, W., and LeRoy, E.: C*tion of Microvascular Endothelial Cells from Human Preputial Skin, In Vitro 16, 675, 1980
Neonatal foreskins(See Reference)
人類人類 (成年人和小孩)ForeskinCollagenase: 0.5%Dulbecco's MEM w/10% calf serumFolkman, J., Haudenschild, C. C., and Zetter, B. R.: Long-term Culture of Capillary Endothlial Cells, Proc Natl Acad Sci U S A 76, 5217, 1979
人類人類Umbilical veinTrypsin: 100 礸/mlTris-HCl,0.2 MJaffe, E.A., Minick, C.R., Adelman, B., Becker, C.G., and Nachman, R.: Synthesis of Basement Membrane Collagen By Cultured Human Endothelial Cells, J Exp Med 144, 209, 1976
人類人類Umbilical veinCollagenase Type 1: 125 u/mlDulbecco's PBSGimbrone Jr., M.A.: Culture of Vascular Endothelium, Prog Hemost Thromb 3, 1, 1976
人類人類Umbilical cordCollagenase: 0.1%Dulbecco's PBSGimbrone, M.A., Cotran, R.S., and Folkman, J.: Human Vascular Endothelial Cells in Culture: Growth and DNA Synthesis, J Cell Biol 60, 673, 1974
人類人類Umbilical cordCollagenase: 0.2%Cord bufferJaffe, E., Nachman, R., Becker, C., and Minick, C.: Culture of Human Endothelial Cells Derived from Umbilical Veins. Identification by Morphologic and Immunologic Criteria, J Clin Invest 52, 2745, 1973
(See Reference)
人類人類Umbilical cordTrypsin NF 1:250: 0.125%Saline, normalLewis, L.J., Haok, J.C., Maca, R.D., and Fry, G.L.: Replication of Human Endothelial Cells in Culture, Science 181, 452, 1973
人類人類Umbilical cordTrypsin NF 1:250: 0.25%CMF solutionFryer, D.G., Birnbaum, G., and Luttrell, C.N.: Human Endothelium in Cell Culture, J Atheroscler Res 6, 151, 1966
小鼠小鼠Endothelial lungCollagenase Type 1: 0.2%DMEMWang, J., Sun, C., Gerdes, N., Liu, C., Liao, M., Liu, J., Shi, M., He, A., Zhou, Y., Sukhova, G., Chen, H., Cheng, X., Kuzuya, M., Murohara, T., Zhang, J., Cheng, X., Jiang, M., Shull, G. and Rogers, S.: Interleukin 18 Function in Atherosclerosis is Mediated by the Interleukin 18 Receptor and the Na-Cl Co-Transporter., Nat Med 21, 820-6, 2015
小鼠小鼠Tumor endothelialCollagenase Type 1: 0.2%HBSSKazerounian, S., Gerald, D., Huang, M., Chin, R, Udayakumar, D, Zheng, N., O'Donnell, R., Perruzzi, C., Mangiante, L., Pourat, J., Phung, T., Bravo-Nuevo, A., Shechter, S., McNamara, S. and Duhadaway, K.: RhoB Differentially Controls Akt Function in Tumor Cells and Stromal Endothelial Cells During Breast Tumorigenesis., Cancer Res 73, 50, 2013
小鼠小鼠, 8-14 weekEndothelialCollagenase Type 4: 0.2%HBSSImoukhuede, P. and Popel, A.: Expression of VEGF Receptors on Endothelial Cells in Mouse Skeletal Muscle., PLoS ONE 7, e44791, 2012
小鼠小鼠, 7-10 周Liver endothelialCollagenase: 0.03%DMEMFollenzi, A., Benten, D., Novikoff, P., Faulkner, L., Raut, S. and Gupta, S.:Transplanted Endothelial Cells Repopulate the Liver Endothelium and Correct the Phenotype of Hemophilia A Mice., J Clin Invest 118, 935, 2008
小鼠小鼠, 4 周Endothelial kidneyCollagenase Type 1: 0.1%DMEMKondo, S., Scheef, E., Sheibani, N. and Sorenson, C.: PECAM-1 Isoform-Specific Regulation of Kidney Endothelial Cell Migration and Capillary Morphogenesis., Am J Physiol Cell Physiol 292, C2070, 2007
小鼠小鼠, 胚胎或卵黃囊EndothelialCollagenase Type 3: 200 u/mlPBSBraren Rickmer, Hu Huiqing, Kim YungHae, Beggs HilaryE, Reichardt LouisF, Wang Rong: Endothelial FAK is essential for vascular network stability, cell survival, and lamellipodial formation, J Cell Biol 172, 151-62, 2006
Deoxyribonuclease I: 0.001%
小鼠小鼠, 初生的Microvascular endothelialNeutral Protease: 0.005%DMEMCha, S., Talavera, D., Demir, E., Nath, A. and Sierra-Honigmann, M.: A Method of Isolation and Culture of Microvascular Endothelial Cells from Mouse Skin.,Microvasc Res 70, 198, 2005
Collagenase Type 1: 4%
小鼠小鼠, 4 周Retinal endothelial cellsCollagenase Type 1: 0.1%DMEMSu X, Sorenson CM, and Sheibani N.: Isolation and characterization of murine retinal endothelial cells, Mol Vis 9, 171, 2003
小鼠小鼠, 雄性Endothelial cells from lymph nodeCollagenase Type 1: 0.1%PBSIzawa D, Tanaka T, Saito K, Ogihara H, Usui T, Kawamoto S, Matsubara K, Okubo K, and Miyasaka M: Expression profile of active genes in mouse lymph node high endothelial cells, Int Immunol 11(12), 1989, 1999
小鼠小鼠, 2-4 周Cerebrovascular EndothelialCollagenase/Dispase: 0.1%PBSSapatino, B., Welsh, C., Smith, C., Bebo, B., and Linticum, D.: Cloned Mouse Cerebrovascular Endothelial Cells That Maintain Their Differentiation Markers for Factor VIII, Low Density Lipoprotein, and Angiotensin-Converting Enzyme, In Vitro Cell Dev Biol 29A, 923, 1993
豬豬, 6 個月Valvular endothelialNeutral Protease: 2 u/mlPBSBalaoing, L., Post, A., Lin, A., Tseng, H., Moake, J. and Grande-Allen, K.: Laminin Peptide-Immobilized Hydrogels Modulate Valve Endothelial Cell Hemostatic Regulation., PLoS ONE 10, e0130749, 2015
Collagenase Type 2: 60 u/ml
豬豬Valvular endothelialCollagenase Type 2: 300-600 u/mlDMEMGould, R. and Butcher, J.: Isolation of Valvular Endothelial Cells., J Vis Exp 46, e2158, 2010
豬豬 EndothelialCollagenase Type 1: DMEM w/ 10% calf serumNugent, H., and Edelman, E.: Endothelial Implants Provide Long-Term Control of Vascular Repair in a Porcine Model of Arterial Injury, J Surg Res 99, 228, 2001
(包括 牛)
豬豬HUVEC, porcine pulmonary arterial endothelial cellsCollagenase Type 2: 0.2%DMEMKwak HJ, Lee SJ, Lee YH, Ryu CH, Koh KN, Choi HY, and Koh GY.: Angiopoietin-1 inhibits irradiation- and mannitol-induced apoptosis in endothelial cells, Circulation 101(19), 2317, 2000
豬豬, 6-7 個月Porcine pulmonary endothelialCollagenase Type 1: 0.3%RPMI 1640Hill-Kapturczak N, Kapturczak MH, Block ER, Pa JM, Malinski T, Madsen KM, and Tisher CC.: Angiotensin II-stimulated nitric oxide release from porcine pulmonary endothelium is mediated by angiotensin IV, J Am Soc Nephrol 10(3), 481, 1999
豬豬EndothelialTrypsin: 0.25%Medium 199Shasby, S.: Endothelial Cells Grown On Permeable Membrane Supports, J Tiss Cul Meth 14, 247, 1992
豬豬EndothelialTrypsin: 0.05%DMEMVischer, P., and Buddecke, E.: Alteration of Glycosytransferase Activities during Proliferation of C*ted Arterial Endothelial Cells and Smooth Muscle Cells, Exp Cell Res 158, 15, 1985
豬豬EndothelialCollagenase Type 2: 0.1%Dulbecco-Vogt MEM w/o serumDickinson, E. and Slakey, L.: Plasma-derived Serum as a Selective Agent to Obtain Endothelial Cultures from Swine Aorta, In Vitro 18, 63, 1982
Aortic
豬豬, 30-40 公斤EndotheliaCollagenase Type 4: 0.025%Medium 199Merrilees, M.J., and Scott, L.: Interaction of Aortic Endothelial and Smooth Muscle Cells in Culture, Atherosclerosis 39, 147, 1981
Aortic
豬豬, 20-30 周EndothelialCollagenase: 0.1%Medium 199 w/BSS and HEPES or NaHCO3Slater, D.N., and Sloan, J.M.: The Porcine Endothelial Cell in Tissue Culture,Atherosclerosis 21, 259, 1975
Aortas 
Veins
豬豬, 60-100 天AortaTrypsin: 0.1%Phosphate bufferCoulson, W.F.: The Effect Of Proteolytic Enzymes on the Tensile Strength of Whole Aorta and Isolated Aortic Elastin, Biochim Biophys Acta 237, 378, 1971
(see reference)
兔兔Corneal endothelial cells (CEC)Hyaluronidase: 0.05%DMEMChoi, J., Ko, M., and Kay, E.: Subcellular Localization of the Expressed 18 kDa FGF-2 Isoform in Corneal Endothelial Cells, Mol Vis 6, 222, 2000
兔兔, 2-3公斤Endothelial, aorticElastase: 0.2%Hanks solutionHaley, N., Shio, H., Fowler, S.: Characterization of lipid-laden aortic cells from cholesterol-fed rabbits. I. Resolution of aortic cell populations by metrizamide density gradient centrifugation, Lab Invest 37, 287, 1977
大鼠大鼠, SD, 雄性, 250-300 克Smooth muscle, aortaSoybean Trypsin Inhibitor: 0.25%HBSS with 0.2 mM Ca++Schwertschlag, U.S., and Whorton, A.R.: Plaet-Activating Factor-Induced Homologous and Heterologous Desensitization In Cultured Vascular Smooth Muscle Cells, J Biol Chem 263, 13791, 1988
大鼠大鼠, SD, 雄性, 350 - 450 gLipocytesCollagenase: 0.015%DMEM/Ham's F-12Friedman, S. and Roll, F.: Isolation and Culture of Hepatic Lipocytes,Kupffer Cells, and Sinusoidal Endothelial Cells by Density Gradient Centrifugation with Stractan,Anal Biochem 161, 207, 1987
Kupffer
Sinusoidal endothelial
大鼠wistar大鼠, 雄性, 3 個月EndothelialPronase: 0.25%HBSSNagelkenke, J., Barto, K., and VanBerkel, T.: In vivo and in vitro uptake and degradation of acetylated low density lipoprotein by rat liver endothelial, Kupffer, and parenchymal cells, J Biol Chem 258, 12221, 1983
Kupffer
Parenchymal
大鼠京都大鼠, 雄性, 100 - 200 克EndothelialCollagenase Type 2: 0.05%HBSSDiglio, C.A., Grammas, P., Filiberto Giacomelli, M.S., and Wiener, J.: Primary Culture of Rat Cerebral Microvascular Endothelial Cells, Lab Invest 46, 554, 1982
Cerebral
大鼠大鼠, 300 克, 和 豬, 30-40 公斤EndothelialTrypsin: 0.05%Medium 199 and 0.01M EDTAMerrilees, M.J., and Scott, L.: Interaction of aortic endothelial and smooth muscle cells in culture. Effect on glycosaminoglycan levels, Atherosclerosis 39, 147, 1981
Thoracic aorta
大鼠大鼠ForeskinCollagenase: 0.5%Dulbecco's MEM w/10% calf serumFolkman, J., Haudenschild, C. C., and Zetter, B. R.: Long-term Culture of Capillary Endothlial Cells, Proc Natl Acad Sci U S A 76, 5217, 1979
大鼠wistar大鼠, 成年的, 170 克EndothelialTrypsin: 0.5%BSSPhillips, P., Kumar, P., Kumar, S., and Waghe, M.: Isolation And Characterization of Endothelial Cells From Rat And Cow Brain White Matter, J Anat 129, 261, 1979

 

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