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其他組織消化手冊

更新時間:2016-02-16點擊次數(shù):1141

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Worthington組織消化指南

引言

組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細胞生物學(xué)研究的原代細胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年,但是對其組織消化和細胞收集的作用機制卻沒有全面的理解。  由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機選擇或基于過去的經(jīng)驗,而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案,以及如何根據(jù)具體實驗?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實驗結(jié)果。

細胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個細胞,而影響結(jié)果的原因有很多,包括(不限于)以下:

1、組織類型

2、物種來源

3、動物年齡

4、遺傳改造情況(如knockouts)

5、所用的消化培養(yǎng)液

6、所用的酶

7、消化酶中的雜質(zhì)

8、所用消化酶的工作濃度

9、溫度

10、孵育時間

通常前四個原因沒辦法選擇,而剩下的原因一般由經(jīng)驗決定以獲取zui適實驗結(jié)果。

通過查閱文獻來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實驗數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動態(tài)的特性,以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外,組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成,這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育(年齡)之間存在明顯的差異,這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶,如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。

本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細胞收集知識和方法,描述了標(biāo)準(zhǔn)的實驗步驟, 以便于制定一個*的細胞分離方案,同時列舉了一些相關(guān)的參考文獻。

下表列出多種組織的適宜消化酶(含參考文獻,以組織類型和物種分類,詳見鏈接)

脂肪組織

腎上腺組織

骨組織

腦組織

軟骨組織

結(jié)腸組織

內(nèi)皮組織

上皮組織

眼

心臟

腸

腎

肝

肺

淋巴結(jié)

乳腺

其它組織

其他組織

肌組織

神經(jīng)組織

胰腺

腮腺

垂體

前列腺

生殖

動物鱗片

皮膚

脾臟

干細胞

胸腺

甲狀腺/甲狀旁腺

扁桃體

腫瘤

 

 

 

注:使用Worthington公司消化酶的文獻不限于上表鏈接中所列,一般而言,Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。

 

其他組織消化手冊

 

 

物種詳細來源細胞名稱消化用酶培養(yǎng)基參考文獻
馬馬Tendon CellsCollagenase Type 1: 0.1%DMEMNemoto, M., Kizaki, K., Yamamoto, Y., Oonuma, T. and Hashizume, K.: Tenascin-C Expression in Equine Tendon-derived Cells During Proliferation and Migration., J Equine Sci 24, 17-24, 2013
人類人類, 3-7 歲Dental pulp stem cellsCollagenase Type 1: 0.3%DMEMSalmon, B., Bardet, C, Khaddam, M. Naji, J., Coyac, B., Baroukh, B., Letourneur, F., Lesieur, J., Decup, F., Le Denmat, D., Nicoletti, A., Poliard, A, Rowe, P., Huet, E., Vital, S. and Linglart, A.: MEPE-Derived ASARM Peptide Inhibits Odontogenic Differentiation of Dental Pulp Stem Cells and Impairs Mineralization in Tooth Models of X-linked Hypophosphatemia., PLoS ONE 8, e56749, 2013
Neutral Protease: 0.4%
人類人類Dental pulp stemCollagenase Type 1: 0.3%DMEM/F12Bonnamain, V., Thinard, R., Sergent-Tanguy, S., Huet, P., Bienvenu, G., Naveilhan, P., Farges, J. and Alliot-Licht, B.: Human Dental Pulp Stem Cells Cultured in Serum-Free Supplemented Medium., Front Physiol 4, 357, 2013
Neutral Protease: 0.4%
人類人類Fungiform taste papillaeCollagenase Type 1: 550 u/mlsee referenceOzdener, H., Spielman, A. and Rawson, N.: Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells, J Vis Exp 63, e3730, 2012
Elastase: 10 u/ml
Soybean Trypsin Inhibitor: 0.09%
人類人類Adipose derived stromalCollagenase Type 2: 0.075%DMEMPanetta, N., Gupta, D., Kwan, M., Wan, D., Commons, G. and Longaker, M.: Tissue Harvest by Means of Suction-Assisted or Third-Generation Ultrasound-Assisted Lipoaspiration Has No Effect on Osteogenic Potential of Human Adipose-Derived Stromal Cells., Plast Reconstr Surg 124, 65, 2009
人類人類Carotid artery plaque macrophageCollagenase Type 4: 450 u/mlHBSSPatino WillmarD, Kang Ju-Gyeong, Matoba Satoaki, Mian OmarY, Gochuico BernadetteR, Hwang PaulM: Atherosclerotic plaque macrophage transcriptional regulators are expressed in blood and modulated by tristetraprolin, Circ Res 98, 1282-9, 2006
Deoxyribonuclease I: 500 u/ml
Soybean Trypsin Inhibitor: 0.1%
人類人類SynoviocytesCollagenase: 0.2%DMEM/F12Chen V, Croft D, Purkis P, Kramer IM: Co-culture of synovial fibroblasts and differentiated U937 cells is sufficient for high interleukin-6 but not interleukin-1beta or tumour necrosis factor-alpha release., Br J Rheumatol 37, 148-56, 1998
人類人類Peptic cellsCollagenase Type 4: 0.1%Ringer solutionLanas. A., Ner鉚n, J., Esteva, F. and S謾inz, R.: Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs and Prostaglandin Effects on Pepsinogen Secretion by Dispersed Human Peptic Cells., Gut 36, 657-63, 1995
Soybean Trypsin Inhibitor: 0.2%
人類人類Periapical granulomaCLSPA: 0.25%RPMI-1640Stern MH, Dreizen S, Mackler BF, Levy BM: Isolation and characterization of inflammatory cells from the human periapical granuloma, J Dent Res 61, 1408-12, 1982
昆蟲昆蟲, 鱗翅類的昆蟲LepitopteranCollagenase Type 3: 0.35%Dulbecco PBSGoodwin, R and McCawley, P: Initiating Attached Cell Lines From the Lepidoptera (Insecta), Meth Cell Sci 3, 567, 1977
Hyaluronidase: 0.01%
小鼠小鼠, 26-30 克Myenteric plexusCollagenase Type 2: 0.13%Neurobasal ASmith, T., Grider, J., Dewey, W. and Akbarali, H.: Morphine Decreases Enteric Neuron Excitability via Inhibition of Sodium Channels., PLoS ONE 7, e45251, 2012
小鼠小鼠Spleen, bone marrow endothelialCollagenase Type 4: 0.3-1.0%PBSShi, C., Jia, T., Mendez-Ferrer, S., Hohl, T., Serbina, N., Lipuma, L., Leiner, I., Li, M., Frenette, P. and Pamer, E.: Bone Marrow Mesenchymal Stem and Progenitor Cells Induce Monocyte Emigration in Response to Circulating Toll-Like Receptor Ligands., Immunity 34, 590, 2011
Deoxyribonuclease I: 20 u/ml
小鼠小鼠CochleaerTrypsin: 0.125%DMEM/F-12Jan, T., Chai, R., Sayyid, Z. and Cheng, A.: Isolating LacZ-Expressing Cells from Mouse Inner Ear Tissues Using Flow Cytometry., J Vis Exp 58, e3432, 2011
小鼠小鼠, 6-8 周Bone marrow mesenchymal stemCollagenase Type 1: 0.25%RPMI 1640Xu, S., De Becker, A., Van Camp, B., Vanderkerken, K. and Van Riet, I.: An Improved Harvest and In Vitro Expansion Protocol for Murine Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells., J Biomed Biotechnol 2010, 105940, 2010
小鼠小鼠, 3-6 周Ear mesenchymal stemCollagenase Type 1: 0.2%DMEM/F12Staszkiewicz, J., Gimble, J., Manuel, J. and Gawronska-Kozak, B.: IFATS Collection: Stem Cell Antigen-1-Positive Ear Mesenchymal Stem Cells Display Enhanced Adipogenic Potential.,Stem Cells 26, 2666, 2008
小鼠小鼠, 6-10 周Salivary Gland and StomachCollagenase Type 4: 0.8%RPMI-1640Ji, H., Rinen, F., Waltzinger, C., Meier, D, Bilancio, A., Pearce, W., Hirsch, E., Wymann, M., Ruckle, T., Camps, M., Vanhaesebroeck, B., Okkenhaug, K. and Rommel, C.:Inactivation of PI3Kgamma and PI3Kdelta Distorts T-cell Development and Causes Multiple Organ Inflammation., Blood 110, 2940, 2007
Deoxyribonuclease I: 1.0%
小鼠小鼠Bone marrowCollagenase Type 1: 0.15%PBSBertoncello, I. and Williams, B.: Hematopoietic Stem Cell Characterization by Hoechst 33342 and Rhodamine 123 Staining., Methods Mol Biol 263, 181, 2004
Neutral Protease: 0.15%
小鼠小鼠, 25-30 gTracheal inflammatory cellsCollagenase Type 4: 0.1%RPMI 1640Minamoto Kanji, Pinsky DavidJ: Recipient iNOS but not eNOS deficiency reduces luminal narrowing in tracheal allografts, J Exp Med 196, 1321-33, 2002
Deoxyribonuclease I: 50 u/ml
Soybean Trypsin Inhibitor: 0.1%
豬豬, 6 月SynoviocytesHyaluronidase: 660 u/mlDMEMKean, T and Dennis, J.: Synoviocyte Derived-Extracellular Matrix Enhances Human Articular Chondrocyte Proliferation and Maintains Re-Differentiation Capacity at Both Low and Atmospheric Oxygen Tensions., PLoS ONE 10, e0129961, 2015
Trypsin: 0.25%
Collagenase Type 2: 583 u/ml
兔兔, 新西蘭, 8-10 周Tenocytes and tendon stem cellsCollagenase Type 1: 0.3%DMEMZhang, J. and Wang, J.: Characterization of Differential Properties of Rabbit Tendon Stem Cells and Tenocytes., BMC Musculoskelet Disord 11, 10, 2010
Neutral Protease: 0.4%
大鼠Lewis大鼠,  MSynovial macrophagesCollagenase Type 1: 250 u/mlDMEMJain, S., Tran, T. and Amiji, M.: Macrophage Repolarization with Targeted Alginate Nanoparticles Containing IL-10 Plasmid DNA for the Treatment of Experimental Arthritis.,Biomaterials 61, 162-77, 2015
大鼠Wistar大鼠,  7-9 周Gingival mitochondriaCollagenase Type 1: 0.115-0.130 %HBSSKaneko, N., Rikimaru, T., Fujimura, T., Mori, S., Hidaka, S. and Kaya, H.: Preparation of Rat Gingival Mitochondria with an Improved Isolation Method., Int J Dent 2010, 275103, 2010
大鼠大鼠, 雄性, 250-350克Submandibular acinarCollagenase: 0.05%PBSSilver, N., Proctor, GB, Arno, M. and Carpenter GH: Activation of mTOR Coincides with Autophagy During Ligation-induced Atrophy in the Rat Submandibular Gland., Cell Death Dis1, e14, 2010
大鼠大鼠, 8-10 周Synovial cellsCollagenase Type 1: 250 u/mlRPMI 1640Moghaddami, M., Cleland, L. and Mayrhofer, G.: MHC II+ CD45+ Cells from Synovium-Rich Tissues of Normal Rats: Phenotype, Comparison with Macrophage and Dendritic Cell Lineages and Differentiation into Mature Dendritic Cells In Vitro., Int Immunol 17, 1103, 2005

 

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